項目十七 T淋巴細胞表面标志和功能检测.docVIP

项目十七　T淋巴细胞表面标志和功能检测 一、E花环形成试验 (Erythrocyte rosette formation assay) 　　 【实验原理】 　　人外周血T淋巴细胞表面具有绵羊红细胞(SRBC)受体，可与SRBC结合形成花环样细胞团(即E花环)。此试验用于计数T细胞数量，进而可判断机体细胞免疫状况。由于T 细胞的异质性，其中在4℃放置1h以上，所形成的花环数代表T细胞总数，称为总花环(Et花环)，而淋巴细胞与SRBC混合后不经4℃作用，立即反应形成的花环称为活性花环(Ea花环)。 　　【试剂和器材】 　　1．肝素抗凝剂　用Hanks液将肝素配成500U/ml，分装，每管0.1ml，置4℃备用。 　　2．淋巴细胞分离液(密度为1.077±0.001)。 　　3．小牛血清　56℃加热灭活30min，按2:1比例与沉积SRBC混合，置37℃30min，离心，收集血清备用。 　　4．0.5％SRBC悬液　取脱纤维或Alsever液保存的羊血，用5～10倍量生理盐水洗 3 次。第3次2500r/min离心10min，弃上清液，用生理盐水配成0.5％的SRBC悬液(约108个细胞/ml)。 　　5．0.8％戊二醛　取30.25ml 4.5 g/L NaCl 盐水，加入1ml 25％戊二醛即可。 　　6．姬姆萨-瑞氏染液　取磷酸缓冲液(PB：1/15 mol/L, pH7.0～