原浆型星形胶质细胞调控神经干细胞定向分化的优化比例筛选的论文.docVIP

　　原浆型星形胶质细胞调控神经干细胞定向分化的优化比例筛选的论文 【摘要】 目的 将神经干细胞(nsc)与原浆型星形胶质细胞(pas)以不同比例进行体外共培养，观察nsc的定向分化的差异，筛选出有利于向神经元分化的最佳方案，为体内实验提供依据。方法 根据nsc与pas的比例进行分组：3:1组;2:1组;1:1组;1:2组，共培养10天后，采用免疫组化法对分化神经元进行dapi荧光标记，在显微镜下随机选取20个视野，每次计数100个细胞，计算神经元在nsc中所占的比例，并进行统计学处理。结果 nsc：pas 2：1组分化得到的神经元数量最多，与分化的胶质细胞比例为65%:35%;而1：1组、3：1组稍低一些，比例分别为61%:39%和59%:41%;1:2组比例最低为57%:43%。结论 在离体细胞共培养的实验中，因细胞的比例不同，nsc分化亦存在差异，其中nsc:pas为2:1时，nsc分化为神经元的比例最高。　　【关键词】 星形胶质细胞;神经干细胞;分化;比例 　　a selection of optimized ratio of the protoplasmic and fibrous astrocytes to the directional differentiation of neural stem cell 　　li min,zegn lin,liu yuan,et al. 　　(state key laboratory of trauma,burns and bined injury,department 3,institute of surgery research,daping hospital,third military medical university,chongqing 400042,china) 　　abstract: objective through culturing nsc aximum amounts of neurons can differentiate from nsc.methods by coculturing of nsc munohistochemisty ly.the data nsc in the ratio of 2:1(65%) uch more than that in the other groups.the groups of 1:1 and 3:1(61% and 59%) ay be more advantageous for nsc in differentiating into neurons. 　　key cell;differentiation;ratio 　　本室在实验中观察到原浆型星型胶质细胞(protoplasmic astrocyte，pas)与纤维型星型胶质细胞(fibrous astrocyte，fas)相比更有利于神经干细胞(neural stem cell，nsc)向神经元的分化[1]。.但不同比例条件下nsc向神经元分化的情况可能存在差异，为此本实验将nsc与pas以不同比例进行体外共培养，观察nsc的定向分化的差异，筛选出有利于向神经元分化的最佳方案，为体内实验提供依据。 　　材料与方法 　　1 实验动物 　　孕13～14天的大鼠和新生2天的大鼠。 　　2 试剂与材料 　　10%胎牛血清(fbs，hyclone)，2mmol/l l谷氨酰胺(sigma)，0.6%葡萄糖，dmem/f12培养基(hyclone)，多聚赖氨酸，0.25%胰蛋白酶 (sigma)，10mmol/l lleucinemethylester(sigma)，0.15mmol/l edta，hanks液(自备)，兔抗大鼠igg(gfap,sigma)，小鼠抗大鼠igg(nf200,sigma)，羊抗小鼠tritc(igg荧光控制体，北京中山公司)，0.4%tritonx100，甲醇，30%h2o2，0.01m pbs(北京中山公司)。 　　3 实验方法 　　3.1 pas的培养 新生2天的sd大鼠，无菌条件下剔除软脑膜及血管，取大脑皮层组织，剪碎，0.25%胰蛋白酶37℃消化30分钟，培养液(10%胎牛血清，2mmol/l l谷氨酰胺，0.6%葡萄糖，dmem) 吹打成细胞悬液，接种于培养瓶，孵育30分钟，翻转瓶子吸出细胞悬液，接种于涂有多聚赖氨酸的培养瓶中，密度为1×106个/ml，孵箱中培养，每3～5天换液1次。培养至14天后，向培养基中加入10mmol/l lleucinemethylester并孵育1小时以杀死小胶质细胞，用新鲜培养基洗2次，孵育2小时，37℃摇床上以180r/min振荡16小时，o2a前体细胞被摇起，