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实验六、大肠杆菌质粒DNA的提取和电泳检测
实验六 大肠杆菌质粒DNA的提取及检测;实验目的 ;实验原理;实验原理;实验原理;碱裂解法实验原理;实验原理;实验材料、主要仪器及试剂 ;试剂
（1）溶液Ⅰ：50 mmol/L 葡萄糖
25 mmol/L Tris·HCl（pH8.0）
10 mmol/L EDTA（pH8.0）
灭菌后4℃保存
（2）溶液Ⅱ：0.2mol/L NaOH
1% SDS（pH值12.6）
（3）溶液Ⅲ：5mol/L KAc 60ml
冰乙酸 11.5ml
水28.5ml（pH4.8）
（4）LB培养基
（5）琼脂糖
（7）1×TAE电泳缓冲液（pH 8.0）：10 mmol/LTris·Cl
1 mmol/L EDTA
（8）上样缓冲液（溴酚蓝
（9） 溴化乙锭（1mg/ml）;实验步骤;实验步骤;实验步骤;3.琼脂糖凝胶电泳检测（合并下次一起电泳）
（1）凝胶制备
①取琼脂糖0.8g，加入100ml的1×TAE电泳缓冲液，配成浓度为0.8%的琼脂糖凝胶。微波炉加热煮沸，使琼脂糖完全溶解（注意不要溅出）。待凝胶溶液冷却至 60℃左右时，加入溴化乙锭至终浓度为0.5μg／ml，倒进制胶模具中。
②室温下待凝胶溶液完全凝固，小心取出梳子，将带有凝胶的模具放置于电泳槽中。
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（2）上样
在DNA样品中加入1／6体积的上样缓冲液，充分混匀。用移液器将DNA样品加入样品孔中。
（3）电泳
接通电泳槽与电泳仪的电源，一般正极为红色，负极为黑色，DNA样品由负极往正极泳动。电压降选择为l～5V／cm（长度以两个电极之间的距离计算），电泳的时间根据不同的胶浓度与胶长度而异。
（4）观察结果
电泳结束后取出胶膜，使用凝胶成像系统拍照,观察。对比标准DNA条带和未知DNA条带，观察其带型和迁移距离，即可获得未知样品的浓度、纯度和相对分子质量大小。;称琼脂糖;注意事项;思考题
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