不同肿瘤细胞表面MICA的表达及NK细胞杀伤活性的研究的论文.docVIP

　　不同肿瘤细胞表面MICA的表达及NK细胞杀伤活性的研究的论文 【摘要】 目的：观察不同肿瘤细胞表面mica的表达及其对nk细胞杀伤活性的影响。方法：以体外培养的k562（人慢性髓原白血病细胞株）、mcf7(乳腺癌细胞株)、hr8348(直肠腺癌细胞株)、e2(人鼻咽癌细胞株)、hela(人宫颈癌细胞株)为靶细胞，流式细胞仪检测细胞表面mica的表达，以k562细胞作为对照，应用ldh释放法检测不同效靶比情况下体外培养的nk细胞对靶细胞的杀伤活性。结果：k562、mcf7、hr8348、e2、hela细胞表面均表达mica，体外杀伤试验表明nk细胞对上述肿瘤细胞均有杀伤活性，antimica单抗可部分封闭nk细胞对靶细胞的杀伤活性。结论：nk细胞对k562、mcf7、hr8348、e2、hela细胞具有较高的杀伤活性，可作为一种生物治疗手段。 【关键词】 自然杀伤细胞 mica 自然杀伤细胞受体 细胞毒性试验 　　analysis of the expression of mica on tumor cell lines of different histotypes and their sensitivity to nk cytotoxicity 　　mei jiazhuan,guo kunyuan,ei,chang hong. 　　department of hematology, zhujiang hospital,the southern medical university, guangzhou 510282, china 　　［abstract］ objective:to investigate the expression of mhc class ⅰ chainrelated gene a(mica) on different human tumor cells(k562,mcf7,hr8348,e2,hela) and their sensitivity to nk cytotoxicity.methods:cytotoxicity of nk cells(isolated from 3 healthy persons) ica easured by facs.results:different level of mica or cell lines, antimicamab could partially inhibit the cytotoxicity of nk cells.conclusion:nkg2dmica interaction can trigger the cytotoxicity of nk cells against tumor,nk cells can be a kind of effector cell for the treatment of some certain tumors. 　　［key ica；nk cell receptor 　　nk细胞对靶细胞的识别无mhc限制性,可以在无预先致敏的情况下杀伤肿瘤细胞,是机体抗肿瘤免疫的第一道天然防线。.mica是nk细胞表面重要活化受体nkg2d的配体,主要表达于应激条件下的肠粘膜上皮细胞及上皮源性的肿瘤细胞,如肺癌、乳腺癌、肾癌、卵巢癌、前列腺癌和结肠癌等，它通过与nkg2d结合可以直接活化nk细胞,提高nk细胞对靶细胞的杀伤活性。本文主要探讨不同肿瘤细胞表面mica的表达及其对nk细胞的杀伤活性影响。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 分离nk细胞用的缓冲液（磷酸盐缓冲液，ph 7.2，加入0.5%bsa,2 mmol/l edta，miltenyi biotec公司产品），抗cd56免疫磁珠（miltenyi biotec公司产品），鼠抗人mica单抗（amo1，igg1）由德国alexander.steinle教授惠赠，fitc标记的山羊抗小鼠igg(ebioscience公司产品)，rpmi1640(gibco公司产品)，淋巴细胞分离液购自上海试剂二厂，rhil2为上海华新公司产品，杀伤活性检测试剂盒(cytotox96 nonradioactive cytotoxocity assay)购自promega公司，人鼻咽癌细胞株e2购自军科院李春海教授，乳腺癌细胞株mcf7由我院苏国强博士惠赠，人慢性髓原白血病细胞株k562由我科冻存，直肠腺癌细胞株hr8348及宫颈癌细胞株hela购自中科院上海细胞库。 　　1.2 nk细胞的分离纯化 用淋巴细胞分离液常规分离健康个体外周血单个核细胞, 经pbs洗涤2次，计数细胞，然后按每107细胞加入80 μl缓冲液及20