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采后病害生物防治
一、实验目的
1.通过用生防菌、靶标菌在采后果实的分别接种，掌握水果蔬菜生物防治的方法。生防酵母菌的筛选与活性测定。
2. 观察不同类型的生防菌对植物病原菌的生防效果，了解生物防治的重要性。
二、实验原理
将生防菌与病原菌菌分别组合接种在果实上，储藏后，观察生防菌对病原菌的拮抗活性。观察生防菌的防治作用等。;三、实验材料
1.果实材料：苹果
2.病原：苹果炭疽菌(Glomerella cingulata)
3.生防菌：放线菌
四、实验操作
(一) 打孔法
1.果实表面消毒。选择外观整齐、无病虫危害的健康苹果用2%的NaOCl表面消毒2min，再冲洗，晾干后，备用。或用酒精表面消毒。
2.打孔。用消毒的直径为4mm的打孔器在苹果果实腰部一圈打孔4个，孔直径（d）3-5mm，深度3-4mm，用无菌棉吸干孔内汁液。
3. 分别配制苹果炭疽病菌、生防菌的孢子悬浮液。每个纯化培养皿加无菌水6-8毫???，用刮产混匀，备用。;4.接种。每孔分接种20-30?l微升，用胶带封住接种孔。接种组合如下：孔1、孔3：苹果炭疽病菌；孔2、孔4：苹果炭疽病菌+生防菌。将果实单个放在托盘上，外套一塑料袋以保持95%左右的相对湿度，置于25?C下贮藏或装入塑料筐内在室温下7天贮藏。用只接种病原菌、无菌水的苹果分别作为阳性和阴性对照。或者先接种酵母菌悬液， 25?C下放置24h后，再接种青霉、炭疽病原菌孢子悬浮液30?l，放入培养箱（25 ?C ）中培养3-5天。;(二) 表面涂抹法
活性酵母菌菌株的筛选
1.在13℃-15℃贮藏条件下进一步进行筛选
2. 酵母培养液稀释3种不同浓度
3.将酵母培养液均匀涂抹于苹果表面上，放置2-3天待酵母菌在苹果表面定植后，在炭疽菌和青霉菌孢子悬浮液浸泡/喷洒30min.
4.晾干后将果实单个放在托盘上，外套一塑料袋以保持95%左右的相对湿度，置于上述温度下贮藏。每一菌株重复3次，用只接种病原菌的苹果作对照。;五、实验结果记录
测定果实的发病率及病斑直径。
观察不同类型的生防菌对植物病原菌的生防效果；绘制接种方法图。
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