上海科华HBsAg-ELISA两步法.docVIP

PAGE  PAGE 6 医院检验科免疫室乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（酶联免疫法）标准操作规程文件编号： 生效日期： 年 月 日 版本：第1版 第 页，共　页 检验申请 单独检验项目申请：乙型肝炎病毒表面抗原（缩写HBsAg）测定；组合项目申请：肝炎标志物检查组合。临床医生根据需要提出检验申请。 样本采集与处理 2.1 样本采集 2.1.1 常规静脉采血约2ml，不抗凝，置普通试管中，或采用含分离胶的真空采血管。也可采集血浆，用肝素、EDTA或枸橼酸盐抗凝。 2.1.2 检验申请单和血样本试管标上统一且唯一的标识符。 2.1.3 急诊样本采集后，在检验申请单上填写样本采集时间。 2.1.4 样本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。专人负责样本的接收并记录样本的状态，对不合格样本予以拒收。 2.1.5 下列样本为不合格样本 2.1.5.1 样本量不足：少于0.3ml的全血样本，或少于0.1ml的血清或血浆。 2.1.5.2 对检测结果可能有干扰的样本，包括严重溶血、严重浑浊的样本。 2.1.5.3 无法确认样本与申请单对应关系的。 2.1.5.4 其他如标识涂改、样本试管破裂等。 2.2 样本保存 2.2.1接收样本后放置1-2h后将样本离心分离出血清或血浆，避免溶血。离心必须达到3000rpm 15min，离心后的血清中不能含有颗粒物和微量纤维蛋白。 2.2.2 样本保存时间：室温（15-25℃）下可稳定48h，普通冰箱中（2-8℃）稳定7d，在-20℃最多可保存4周。避免反复冻融。不可使用热灭活的样本。 2.2.3已完成测试的样本保持完整的识别号，置4-8℃冰箱内保存7d。 2.3 样本采集的注意事项 采血前使受检者保持平静、松弛，避免剧烈活动。 医院检验科免疫室乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（酶联免疫法）标准操作规程文件编号： 生效日期： 年 月 日 版本：第1版 第 页，共　页3． 检验原理 本试剂盒采用抗-HBs包被反应板，加入待测样本，经孵育后，加入抗-HBs-HRP，当样本中存在HBsAg时，该HBsAg与包被抗-HBs结合并与抗-HBs-HRP结合形成抗-HBs-HBsAg-抗-HBs-HRP复合物，加入TMB底物产生显色反应，反之则无显色反应。 4．试剂及其他用品 4.1试剂：乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（上海科华生物工程股份有限公司生产），试剂盒药品批准文号：国药准字48人份)； 国药准字96人份)。未打开的试剂盒保存于2-8℃，不可冻存。开启的包被反应板放入干燥剂密封后在2-8℃保存并尽快使用。 4.2 试剂盒组分 微孔反应板 HBsAg阴性对照 HBsAg阳性对照 酶结合物 显色剂A 显色剂 B 终止液 洗涤液 （ 蒸馏水1：25稀释） 封片纸 说明书 4.3 其他试剂及用品 加液器： 型号。 离心机： 型号。 温箱（或水浴箱）： 型号。 洗板机： 型号。 酶标仪： 型号。 5． 室内质控与室内质控规则 5.1 质控品：采用卫生部临床检验中心临床免疫室或其他单位提供的免疫质控血清，浓度 IU/ml。 医院检验科免疫室乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（酶联免疫法）标准操作规程文件编号： 生效日期： 年 月 日 版本：第1版 第 页，共　页5.2 质控品重建方法：采购来的质控品按每周用量分装-20℃冻存，复融后充分颠倒混匀。 5.3 质控品测定：在每一次（板）样本中测定质控血清。 5.4 质控规则：绘制质控图，求出SD和CV值。 6．检测步骤 （1） 洗涤液配制： 将浓缩洗涤液用蒸馏水（或去离子水）作1：25稀释。 （2） 加样 加入75微升待测样本和阴、阳性对照于反应孔中（共预留阴性对照3孔、阳性对照1孔、建议预留空白对照1孔。），用封片纸覆盖反应板后，将反应板置37℃孵育60分钟。 （3） 取出反应板，撕去封片，在已加入待测样本和阴、阳性对照的孔中加入50微升酶结合物；在微孔震荡器上震荡10秒钟，或手工轻轻震荡10秒钟; 用封片纸覆盖反应板后，将反应板置37℃孵育30分钟。 （4） 洗板 手工洗板：弃去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置30-60秒，甩干，重复5次后，在干净的吸水纸上拍干。 洗板机洗板：采用 洗板机洗板，选择洗涤5次程序，用配置的工作浓度洗涤液注满每孔，每次工作