第六章免疫标记技术教程.pptx

免疫标记技术;经典免疫学技术;沉淀反应;凝集反应;补体参与的抗原抗体反应;中和反应;经典免疫学技术的不足;关键问题;免疫标记技术（immunolabelling technique）;免疫标记技术;第八章 免疫标记技术;第八章 免疫标记技术;一、放射免疫技术 二、免疫放射技术 ;一、放射免疫技术 二、免疫放射技术 ;（一）放射免疫技术的原理 （二）放射免疫技术的基本条件 （三）放射免疫技术的基本类型;（一）放射免疫技术的原理 （二）放射免疫技术的基本条件 （三）放射免疫技术的基本类型;放射免疫技术（radioimmunoassay，RIA）;放射免疫技术的原理;（一）放射免疫技术的原理 （二）放射免疫技术的基本条件 （三）放射免疫技术的基本类型;（二）放射免疫技术的基本条件 ;1．抗原标准品与待测抗原 ;2. 放射性同位素;3. 特异性抗体;4. 常用的同位素标记方法;5. B与F的分离技术;分离剂的要求 ;（1）双抗体沉淀分离法 ;（2）化学试剂分段沉淀分离法;（3）固相法 ;（4）吸附法 ;（一）放射免疫技术的原理 （二）放射免疫技术的基本条件 （三）放射免疫技术的基本类型;（三）放射免疫技术的基本类型;一、放射免疫技术 二、免疫放射技术 ;（一）免疫放射技术的原理 （二）免疫放射技术的基本条件 （三）免疫放射技术的基本类型;（一）免疫放射技术的原理 （二）免疫放射技术的基本条件 （三）免疫放射技术的基本类型; 1986年Miles和Hales建立免疫放射分析技术（immunoradiometric assay，IRMA） 标记抗体作示踪剂，在反应系统中加入过量的抗体，待测物（或标准品）和同位素标记抗体全量反应。 优点： 灵敏度高（可提高6-10倍）、准确度高、重复性好、检样量少 缺点： 干扰因素较多、检测仪器贵、有放射性污染;（一）免疫放射技术的原理 （二）免疫放射技术的基本条件 （三）免疫放射技术的基本类型;（二）免疫放射技术的基本条件 ;（一）免疫放射技术的原理 （二）免疫放射技术的基本条件 （三）免疫放射技术的基本类型;（三）放射免疫技术的基本类型;1. 经典IRMA法;2. 双抗体夹心法;3. 二抗标记法;4. 双标记抗体法;放射分析技术方法学考核指标;第八章 免疫标记技术;一、免疫荧光技术的原理 二、免疫荧光技术的基本条件 三、经典荧光抗体染色法 四、现代免疫荧光技术;一、免疫荧光技术的原理 二、免疫荧光技术的基本条件 三、经典荧光抗体染色法 四、现代免疫荧光技术;Albert Hewett Coons（1912—1978）; 三结合： 抗原抗体反应的高度特异性 荧光的敏感可测性 显微技术的高度精确性 优点： 特异性强、敏感性高、速度快，结果直观，可以检测和定位微量抗原 缺点： 荧光易发生淬灭，荧光染色标本保存困难、易出现非特异性染色问题，镜检结果判定客观性不足 ;一、免疫荧光技术的原理 二、免疫荧光技术的基本条件 三、经典荧光抗体染色法 四、现代免疫荧光技术;1. 荧光素 2. 荧光标记物的制备 荧光检测仪;1. 荧光素 2. 荧光标记物的制备 荧光检测仪;1．荧光素 ;荧光素的性质;荧光的种类;荧光素选择条件;荧光素;1. 荧光素 2. 荧光标记物的制备 荧光检测仪;荧光标记抗体的制备;荧光标记抗体的纯化;荧光标记抗体的鉴定;1. 荧光素 2. 荧光标记物的制备 荧光检测仪;3. 荧光检测仪;（1）荧光显微镜;透射荧光显微镜原理;落射式荧光显微镜;激发滤光板;汞灯光源: 提供激发光(U、V、B、G) ;分色镜: 反射激发光,透过荧光;落射荧光显微镜原理;（2）荧光分光光度计;一、免疫荧光技术的原理 二、免疫荧光技术的基本条件 三、经典荧光抗体染色法 四、现代免疫荧光技术;1. 直接荧光抗体染色法 2. 间接荧光抗体染色法 补体荧光染色法 特殊染色法;1. 直接荧光抗体染色法 2. 间接荧光抗体染色法 补体荧光染色法 特殊染色法;1. 直接荧光抗体染色法;1. 直接荧光抗体染色法 2. 间接荧光抗体染色法 补体荧光染色法 特殊染色法;2. 间接荧光抗体染色法;肿瘤组织中M2型巨噬细胞;1. 直接荧光抗体染色法 2. 间接荧光抗体染色法 补体荧光染色法 特殊染色法;3. 补体荧光染色法;1. 直接荧光抗体染色法 2. 间接荧光抗体染色法 补体荧光染色法 特殊染色法;4．特殊染色法 ;（1）双标记免疫荧光技术;细胞内双标记荧光染色;DAPI+FITC;（3）反衬染色法 ;一、免疫荧光技术的原理 二、免