全血改进线性指数聚合酶链式反应用于焦磷酸测序检测基因.pdf

第 43 卷 分析化学 (FENXI HUAXUE) 研究报告 第 1 期 摇 2015 年 1 月摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 Chinese Journal of Analytical Chemistry 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 55 62 ~ DOI 10. 11895 / j. issn. 0253鄄3820. 140395 : 全血改进线性指数聚合酶链式反应用于 焦磷酸测序检测基因多态性 , , 项 铮1 刘云龙2 邢晓清1 初亚男2 宋沁馨*1 2 周国华1 2 摇 摇 摇 摇 摇 1 药物质量与安全预警教育部重点实验室 中国药科大学 南京 ( , , 210009) 2 南京大学医学院附属金陵医院药理科 南京 ( , 210002) 摘 要 焦磷酸测序是目前基因多态性检测的主要方法之一 但是其前期的样本制备工作较为繁琐 限制了 摇 摇 , , 其在临床检测中的应用 为了简化焦磷酸测序的流程 本研究根据不对称 原理 改进了线性指数聚合酶 。 , PCR , 链式反应 的引物设计方法 增加过量引物的长度和浓度 并结合全血直接扩增技术 建立了基于 (LATE鄄PCR) , , , 普通 聚合酶和高 缓冲液 的全血改进 方 rTaq pH (HpH Buffer) LATE鄄PCR(Improved LATE鄄PCR, imLATE鄄PCR) 法 考察了方法的最优扩增体系 血液抗凝剂对其影响以及全血模板量 采用单管 一步法直接扩增出单链 。 、 。 、 测序模板 成功地对 例临床血样的乙醇脱氢酶基因多态性进行了检测 检测结果可用于指导临床个体化用 , 24 , 药 例样本的基因型分别为 位点 纯合 例 杂合