《微生物的实验室培养》共38张.pptVIP

课题1：微生物的实验室培养;1.了解有关培养基的基础知识； 2.掌握无菌操作技术； 3.了解纯化大肠杆菌的基础知识。;霉 菌;酵母菌; 上图都是一些常见的微生物，微生物是结构简单、形体微小的单细胞、多细胞或没有细胞结构的低等生物，与人类关系密切。人工的培养和分离，使得我们更进一步认识微生物。 今天我们就来学习如何培养和分离大肠杆菌！;1.特点：结构都相当简单,个体多数十分微小，通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构，且体内一般不含有叶绿素，不能进行光合作用。;2.微生物包括五类; 培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。; 固体培养基 液体培养基 半固体培养基;2.不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方;3.培养基内所含的基本物质;4.培养基的用途;1.无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。 无菌操作是培养微生物成功的关键！;（1）消毒定义：;a.灼烧灭菌;b.干热灭菌： 160-170℃ 下加热1-2h。 c.高压蒸气灭菌： 100kPa、121℃ 下维持15-30min.;取2个250ml的三角瓶中分别装入50mlLB液体培养基和50mlLB固体培养基（刚配好，尚未凝固），加上封口膜，牛皮纸包装后高压锅灭菌15min。;灭菌后的培养基在无菌操作台上倒入4个培养皿中，倒后立即置于水平位置上，轻轻晃动，使培养基铺满平皿底部，待凝，使之形成平面。; 1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？; 2.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？;将斜面上培养的大肠杆菌菌种接种到灭菌后的液体培养基中，使其在37℃摇床培养12小时。;;1.平板划线法： 1）灼烧接种环； 2）接种环冷却后，蘸取带菌培养物； 3）在近火焰处，让带菌接种环在固体培养基上划线。 ; 注意事项: 1.接种环只蘸一次菌液，但要在培养基不同位置连续划线多次。 2.划线首尾不能相接。 3.划线后，培养皿倒置培养12~24h。;;分离后，一个菌体便会形成一个菌落，这是消除污染杂菌的通用方法，也是用于筛选菌株的最简便方法之一。;2.稀释涂布平板法; 注意：移液管需要经过灭菌。操作时，试管口和移液管离火焰1~2cm处.;1.临时保藏：接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于4℃冰箱保存。 2.长期保存：甘油冷冻管藏法;（一）培养基的制作是否合格 如果未接种的培养基在恒温箱中保温1～2 d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。;（二）接种操作是否符合无菌要求 如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。;（三）是否进行了及时细致的观察与记录 培养12 h与24 h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。这一步的要求主要是培养学生良好的科学态度与习惯。;1．关微生物营养物质的叙述中，正确的是（ ） A.是碳源的物质不可能同时是氮源 B.凡碳源都提供能量 C.除水以外的无机物只提供无机盐 D.无机氮源也能提供能量;解析：A、B选项的表达是不完整的。有的???源只能是碳源；有的碳源可同时是氮源；有的碳源同时是能源；有的碳源同时是氮源，也是能源。对于C选项，除水以外的无机物种类繁多，功能也多样。对于D选项，无机氮源提供能量的情况还是存在的，如NH3可为硝化细菌提供能量和氮源。;2．下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是（ ） A.防止杂菌污染 B.接种前菌种要进行灭菌 C.培养基和发酵设备都必须灭菌 D.灭菌必须在接种前;退出