无菌苗和土培苗的培养实验报告(共8篇).doc

无菌苗和土培苗的培养实验报告(共8篇) 实验一配制MS及无菌苗的培养 实验一 配制MS及无菌苗的培养 一．实验目的 学习培养基配制及与灭菌的操作方法 二．实验方法 （一） 培养基配制配制培养基300ml（1/2班级人数） ① 用量筒量取500ml蒸馏水倒入烧杯中，用玻璃铅笔划好液位线，再将蒸馏水倒出一半。 ② 称琼脂2.4克倒入烧杯中，再称蔗糖60g备用。 ③ 每组取50ml烧杯一只，用50ml量筒取大量元素30ml，分别用移液管吸取微量元素0.3ml，铁盐1.5ml，维生素B1 0.12ml，维生素B6 0.15ml，烟酸0.15ml，甘氨酸0.3ml，肌醇 1.5ml置于烧杯中备用（注意移液管不能混用） ④ 将加入琼脂的烧杯放在石棉网的文火上煮沸，煮时常用玻璃棒搅动，待琼脂融化后加入蔗糖。蔗糖溶解后将早已吸好的大量元素，微量元素，铁盐有机物的混合液倒入烧杯中，将装好混合液的烧杯用蒸馏水洗三次，倒入300ml烧杯中，加热片刻（注意不要煮沸），讲烧杯离火，加蒸馏水定容至液位线。 ⑤ 用1M的NaOH或1M的HCL将PH调至5.8，调时应用玻璃棒不断搅拌，并用PH试纸测PH值。 ⑥ 用玻璃漏斗将300ml培养基分注于15只三角瓶中，每瓶约20ml。（分注培养基时不可将培养基倒在三角瓶内外壁上） ⑦ 封好瓶 ⑧ 培养基的灭菌（略） 待用 （二） 培养材料的灭菌与接种 ① 接种前用肥皂洗手，特别是将手指洗干净，然后用沾70%的酒精棉球把手和指尖消毒一次 ② 将大豆种子用70%的酒精浸泡灭菌5分钟，再用0.2%氯化汞浸泡灭菌10分钟，然后用灭菌水洗三次备用 ③ 把培养基放在接种台左侧，用70%酒精棉球把接种台擦一遍（清除尘粒） ④ 将接种所用的大小镊子等沾以70%酒精，在酒精灯火焰上灼热灭菌，然后放在支架上，注意不可再行污染。 ⑤ 去掉瓶塞，将三角瓶在火焰上方灼热灭菌（瓶口转动一圈），用镊子将灭菌后备用的大豆放入三角瓶内培养基上，每瓶接种3~5粒（注意大豆的种脐要贴在培养基上，不要放反了） ⑥ 迅速盖上瓶塞，放于培养室内进行培养 实验二 原生质体融合 一、实验目的 本实验是学习和掌握利用酶解法，除去植物细胞壁，获得原生质体的方法。 二、???解原料准备：去试管苗（无菌苗） 三、酶解（一步法） 在超净工作台上操作（洗手、灭菌略） 将是管用1%HgCl2 浸泡五分钟，期间不时摇动，然后倒出HgCl2 液，用灭菌水冲洗5次，再用刀片切下大豆胚轴，撕去表皮，切成小块放入酶液Ⅰ中，同时，撕去子叶的下表皮切成小块放入酶液Ⅱ中 每10ml酶液中放约2g材料，在26oC下酶解四小时，没半小时轻轻摇动一会 实验三 原生质体纯化与收集 一、操作步骤： ① 将酶解后的大豆下胚轴原生质体用200目不锈钢网过滤，除去解离的组织，再用22%蔗糖溶液冲洗网上的残渣（蔗糖溶液的体积与酶液的相等） ② 滤液（酶液和蔗糖液）装入离心管，以600r/min离心6min。 ③ 带原生质体漂浮后，吸去下面的液体及残渣（插吸管是要迅速，不能回气） ④ 加入17﹪蔗糖液6-8ml，混匀后离心，600r/min 6min，吸去下液及残渣，重复一次。 ⑤ 加入1-2ml 0.16mol/L CaCl2 ·2H2O,使原生质体的密度在2X10个/ml条件下，悬浮待用（不能用完，放冰箱保存）。 二、操作步骤 ① 将酶解后的子叶原生质体过滤，再用0.16mol/L CaCl2 ·2H2O (等体积)冲洗残渣（少次多量）。 ② 在600r/min 条件下离心，6min 后吸去上清液。 ③ 加入0.16mol/L CaCl2 ·2H2O液，使原生质体悬浮。 ④ 用长注射针头字管底轻轻加入6-8ml 14%的蔗糖液，使之形成界面。 ⑤ 用600r/min 离心6min，待原生质体形成一条带时，吸去上，、下液体及残渣。 ⑥ 用0.16mol/L CaCl2 ·2H2O液洗涤1次，离心后吸去上清液。 ⑦ 加入1-2ml 0.16mol/L CaCl2 ·2H2O液,使原生质体的密度在2X10个/ml条件下，悬浮待用。 33 实验四 体细胞杂交 操作步骤： ① 将下胚轴原生质体与子叶原生质体，以1:1的比例混合，用吸管将混合好的原生质体滴在6cm直径的培养皿中。每滴为0.1ml，每培养皿中滴7-8滴，静止15分钟，使原生质体贴在培养皿中。 ② 用吸管吸取PE母液，等体积地加到每滴原生质体上，诱导原生质体融合，在15C的条件下，作用10min，然后用显微镜观察原生质体的粘连。 o 实验五 原生质体培养 操作步骤： ① 用高PH值、高Ca溶液，稀释和洗涤PEG处理过的原生质体，用刻度滴管向