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第三章 培养基成分与配制 一、培养基成分 二、培养基的种类 三、培养基的选择 四、培养基的制备 一、培养基成分 1.无机营养 无机元素在植物生活中非常重要： 镁是叶绿素分子的一部分; 钙是细胞壁的组分之一; 氮是各种氨基酸、维生素、蛋白质和核酸的重要组成部分。 铁、锌和铜是某些酶的组成部分。 除了C、H和O外，已知还有12种元素对于植物的生长是必需的，它们是氮、磷、钾、钙、镁、硫、铁、铜、钼、锰、锌、硼。总共15种元素。 其中前6种元素需要的数量较大，因此称之为大量元素或主要元素。 后6种元素需要的数量较小，因此称为微量元素或次要元素。 按照国际植物生理协会的建议： 植物所需要的浓度大于0.5mmol／L的元素为大量元素; 植物所需要的浓度小于0.5mmol／L的元素为微量元素。 实质上，对于整株植物生长有重要作用的这15种元素，对于组织培养来说也是必需的。各种常用培养基之间在组分上的主要差别，即在于各种盐或离子数量上的不同。由质上来看，各种植物组织所需要的无机营养是相当一致的。 当无机盐在水中溶解的时候，它们发生解离，形成离子。培养基中的活性因子即是这些离子，而不是它们的化合物。一种类型的离子可由一种以上的盐提供。 ? 在White（1943）原来的培养基中，铁是以Fe２(SO４)３的形式加入的，但Street及其合作者在根培养中以FeCI２代替了Fe２(SO４)３ ，这是因为在Fe２(SO４)３中含有Mn和某些其他金属离子杂质。然而， FeCI２看来也并不是一个完全令人满意的铁盐。以这种形式存在的铁只有在PH5. 2左右时才能被组织所利用。已知在根培养中，接种后一周之内培养基的PH值即会由原来的4.9～5.0上升到5·8～6.0，于是根开始表现缺铁症状。为了解决这个问题，现在在多数培养基中铁是以一种螫合形式，即 Fe· EDTA（EDTA乙二胺四乙酸）的形式提供的。以这种形式提供的铁直到PH7.6～8.0仍然可以被植物组织所利用。附带说一下，与根不同，愈伤组织培养物直到PH为6. 0时仍可利用FeCI２ ，这是因为愈伤组织能分泌自然的鳌合剂，而螫合剂可与铁相结合。Fe EDTA可使用FeSO４·7H2O对和Na2·EDTA进行制备，或者，如果可能的话，从市场上直接购买NaFe·EDTA。 在培养基中无机氮的供应可以有两种形式，一种是硝酸盐；另一种是铵盐。当做为唯一的氮源时，硝酸盐的作用要比铵盐好得多，但在单独使用硝酸盐时，培养基的PH会向碱性方向漂移。若与硝酸盐一起加入少量铵盐，则会阻止这种漂移。因此，有好几种培养基都既含有硝酸盐，也含有铵盐。 当某些营养元素的供应不足时，愈伤组织所表现出来的症状如下： 氮——某些组织（五叶地锦）表现出一种很引人注目的花色素苷的颜色；不能形成导管； 氮、钾或磷——细胞过度生长，形成层组织减退； 硫——非常明显地褪绿； 铁——细胞分裂停止； 硼——细胞分裂停滞，细胞伸长； 锰或钼——影响细胞伸长。 2. 有机营养成分 (1)含氮物质 大多数培养的细胞都能合成所有必需的维生素，只是数量上显然不足。为了能使组织很好地生长，在培养基中常常必须补加一种或一种以上的维生素和氨基酸。其中硫胺素（维生素B１）一般认为是一种必需的成分。在其他各种维生素中，已知尤其是吡哆醇（维生素B6），烟酸（维生素B３），泛酸钙（维生素B５）和肌醇也都能改善培养的植物组织的生长状况。各种维生素皆溶于水，唯叶酸例外，先要用少量稀氨水溶解，然后加蒸馏水定容。 为了促进某些愈伤组织和器官的生长，还常使用很多种化学成分不明的复杂的营养混合物，如水解酪蛋白（CH），椰子汁（CM），玉米胚乳，麦芽浸出物（ME），番茄汁（TJ）和酵母浸出物（YE）等。不过，只要可能，应尽量避免使用这些天然物质。这些物质（特别是果实提取物）在样品间的差异将会影响实验结果的可重复性。这是因为，这类提取物所含的生长促进成分的质和量常因组织的年龄和供体植株的品种而变化。此外，只用一种氨基酸也可能有效地取代这些天然物质。 (2)碳源 Haberlandt（1902）曾试图培养绿色的叶肉细胞，这可能是出自绿色细胞对营养的要求比较简单的想法，但这种想法在实验中并未得到证实。现在我们知道，作为一个规律，起初是绿色的组织在培养中会逐渐失去它们的叶绿素，而只依赖于外界碳源生活。即使是那些在培养期间由于某些突然变化或被置于特殊条件之下而获得了色素的组织，也不是碳素自养的。如果在培养基中加入一种