7种中草药醇提取物抑菌杀菌作用的研究.docVIP

　　7种中草药醇提取物抑菌杀菌作用的研究 7种中草药醇提取物抑菌杀菌作用的研究 我国的中草药资源非常丰富，我国劳动人民应用中药已有数千年的历史，许多中草药具有抗菌消炎的作用。该课题组在前期研究的基础上，筛选出地榆、苍术、紫花地丁、半枝莲、大黄、枸骨、千里光等7种常见中草药，用95%酒精提取其活性成分，选取大肠杆菌、枯草杆菌菌、金黄色葡萄球菌、酵母菌等常见污染菌作为靶标菌，通过抑菌、杀菌试验，检测中草药对靶标菌的作用效果，为开发绿色杀菌剂提供参考。 　　1材料与方法 　　1.1试验材料 　　1.1.1 　　供试中草药。 地榆（Radix sanguisorbae）、苍术（Atractylodes rhizome）、紫花地丁（Violae herba）半枝莲（Portulaca grandiflora hook）、大黄（Rheum palmatum）、枸骨（Ilex cornuta）、千里光（Senecio scandens），以上7种中草药均购买于咸宁市温泉中药店，烘干备用。 　　1.1.2 　　供试菌种。枯草杆菌（Bacillus subtilis）、金黄色葡萄球菌 （Staphyloccocus aureus）、大肠杆菌（Escherichia coli）、酵母菌（Saccharomyces cerevisiae），上述菌种均由华中农业大学发酵工程室提供。 　　1.2试验仪器和试剂 　　1.2.1 　　试验仪器。DH5000AB型电热恒温培养箱、Sdash;CJ1D型单人超净工作台、YX280A手提式不锈钢消毒器、J2菌落计数器、DH-101电热恒温本文由.L.收集整理鼓风干燥箱、84Ⅱ型加热磁力搅拌器、BCD216荣事达冰箱。 　　1.2.2 　　试验试剂。1 mol/L NaOH溶液、1 mol/L HCl溶液、75%酒精、95%酒精、牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、马铃薯葡萄糖琼脂培养基。 1.3试验方法 　　1.3.1 　　菌悬液的配制。将大肠杆菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌接种在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基上，37 ℃培养24 h；酵母菌接种在马铃薯葡萄糖琼脂培养基上，28 ℃培养48 h。 　　将培养好的菌种，分别用接种环挑取少许菌体于装有无菌水的试管内，震荡均匀，制成菌悬液。用平板菌落计数法测定其菌液浓度，并用稀释法，使菌液含量数为104 cfu/ml，即为供试菌液。 　　1.3.2 　　中草药提取液的配制。 　　将中草药烘干、粉碎，分别用95%酒精[1]常温下萃取4 d[2]，将提取液离心后，减压蒸馏温度约为50～52 ℃，将中草药提取液中的酒精蒸发。然后用蒸馏水定容到质量浓度为1 g/ml，置于0～4 ℃冰箱中备用。 　　1.3.3 　　体外抑菌试验测定[3]。将固体培养基加热熔化，每20 ml固体培养基加入已装有预定量中草药提取液（0.5、2.0 ml）的无菌培养皿（直径为15 mm）中，再加入0.2 ml菌液（稀释后菌液浓度约为103个/ml），用涂布器涂布均匀，每一处理重复3次，用无菌水作对照。上述操作均在超净工作台内进行。将细菌培养皿倒置，置36～37 ℃恒温培养24 h，将酵母菌培养皿置恒温箱中28 ℃恒温培养48 h后统计菌落个数，计算抑菌率[4]。抑菌率=（对照菌落数-处理菌落数）/对照菌落数100%。 　　1.3.4 　　体外杀菌试验测定。试验时，菌悬液的浓度约为104 cfu/ml。取0.5 ml菌悬液和4.5 ml提取液于无菌小试管中混合均匀（对照组为无菌水），作用至预定时间（5、15 min）后，取0.2 ml菌药混合液接种到装好培养基的培养皿中，用涂布器涂布均匀，每次操作重复3次。将做好的细菌平板倒置放入36～37 ℃恒温培养箱中培养24 h后，将酵母菌培养皿置恒温箱中28 ℃恒温培养48 h后统计菌落个数，统计菌落个数，计算杀菌率[5]。 　　杀菌率 =（对照菌落数-处理菌落数）/对照菌落数100%。 　　2结果与分析 　　2.17种中草药酒精提取液的抑菌试验 　　由表1可见，7种中草药的酒精提取液对4种菌有明显的抑制效果。随着药物剂量的增大，对4种菌的抑制效果显著增强。在药物为2.0 ml时，中草药对枯草杆菌的抑菌作用大小依次为大黄gt;枸骨gt;千里光gt;苍术gt;紫花地丁gt;半枝莲gt;地榆，大黄抑菌率为99.4%，效果最好；中草药对酵母菌的抑菌率均在72.9%以上，其中千里光抑菌能力最强，抑菌率为91.5%；中草药对大肠杆菌的抑菌作用大小依次为地榆gt;苍术gt;大黄gt;半枝莲gt;紫花地丁gt;千里光gt;枸骨，地榆抑菌率最高，为97.2%；中草药对金黄色葡萄球菌的抑菌作用大小依次为大黄gt;地榆gt;枸骨gt;千里光gt;苍术gt;半枝莲gt;紫花地丁，大黄抑菌率为88.3%