五倍子中多酚类物质对DPPH自由基清除作用的电子自旋共振研究.docVIP

　　五倍子中多酚类物质对DPPH自由基清除作用的电子自旋共振研究 【摘要】 　　目的研究五倍子提取物对活性氧自由基的清除作用。方法采用 电子 自旋共振（ESR）和自旋捕集技术直接测定不同浓度的五倍子两种方法提取物对DPPH自由基的清除作用。结果五倍子两种提取物具有良好的清除DPPH自由基的作用, 在实验条件下, 五倍子水提取物清除DPPH自由基的IC50为0.414 7 mg/L，五倍子醇提取物清除DPPH自由基的IC50为0.858 6 mg/L。结论 五倍子中多酚类物质具有较强的抗氧化活性。 【关键词】 五倍子 电子自旋共振技术 DPPH自由基 抗氧化活性 　　Abstract：ObjectiveTo study the action of polyphenols from Galla Chinensis on scavenging DPPH radical. MethodsUsing electron spin resonance(ESR) and spin trapping technology, the scavenging effects of different concentrations of t Galla Chinensis g/L and 0.858 6 mg/L respectively. ConclusionThe polyphenols from Galla Chinensis have strong antioxidant activity. 　　Key agic resonance ,EPR)是研究自由基的最直接和最有效的方法。所谓电子自旋捕集技术［2］就是为了检测和辨认短寿命自由基（如氧自由基），需将一不饱和的抗磁性物质（自由基捕集剂）加入反应体系，捕捉瞬时自由基，生成寿命较长的自由基，通过电子自旋共振仪来检测。 　　目前，关于五倍子清除自由基的研究尚无报道。故本实验采用电子自旋共振法（ESR）和自旋捕集技术对五倍子的抗氧化作用进行研究［3］，探讨了五倍子两种提取物清除1,1-二苯基苦基苯肼(DPPH)自由基的能力，旨在为利用五倍子开发天然的、高效低毒的抗氧化功效因子提供依据。 　　 1 仪器与材料 　　1.1 仪器 　　JEX-RE3X ESR spectro-photometer (日本JEOL公司)，KQ5200超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），RE-52AA旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）， FA2004电子分析天平（上海恒平 科学 仪器有限公司）。 　　1.2 材料 　　五倍子购自佳木斯市金天药店，由本院生药学教研室刘娟教授鉴定为漆树科植物盐肤木Rhus chinesensis Mill五倍子正品。 　　DPPH(1,1-diphenyl-2-picryllhydrazyl)为色谱纯，ESR检测无杂质信号，标准品购自日本东京化成 工业 株式会社。其余试剂均为分析纯。 　　 2 方法 　　2.1 供试样品溶液的配制取五倍子干燥粉末50 g，加水进行超声提取；取五倍子干燥粉末50 g，加95% 乙醇超声提取。各样品提取液减压挥干溶剂，干燥后待用。取各样品提取物适量，精密称定，加甲醇溶解后，配成浓度为0.01，0.1，1.0，10.0 mg/L的溶液。 　　2.2 测试参数条件X波段，磁场范围：（336.0±10.0）mT，微波功率，5 min，室温检测。 　　2.3 DPPH自由基的检测方法 　　2.3.1 空白对照组的测定取甲醇溶液200 μl，加入DPPH 100 μl 剧烈混合后，吸入石英毛细管，放入谐振腔，1 min后在上述测定参数条件下测定DPPH 自由基，记录谱图。 　　2.3.2 样品溶液的测定取五倍子水提物不同浓度的样品溶液200 μl，分别加入DPPH 100 μl 剧烈混合后，按照上述方法进行测定DPPH自由基ESR信号； 五倍子醇提物不同浓度的样品溶液亦按照同样方法测定DPPH自由基ESR信号；记录谱图。 　　 3 结果 　　3.1 ESR指标的测定DPPH是一个相对稳定的自由基，甲醇中测得的DPPH自由基的ESR图谱中，以第三峰高表示DPPH自由基的浓度。抗氧化剂的加入只会使峰的高度降低，不会改变形状，而且随着五倍子水提物和醇提物的浓度增加,其ESR信号强度递减。见图1。 　　清除率=［(HDPPH /HMn)control - (HDPPH /HMn)sample ］ (HDPPH /HMn)control ×100% 　　3.2 五倍子多酚类物质对DPPH的清除作用通过记录的谱图，测量出DPPH和Mn的峰高, 处理数据后，可以看出当加入一定浓度范围的五倍子水提物和醇提物后，DPPH自由基信号明显减弱，清除率随着浓度的增加而提高，