LCMS操作补充资料.doc

LC/MS操作操作注意事項首先確定LC分析條件包括mobile phase、gradent及olumn等，並自備solvent、solventwaste bottles、vials (1.8 ml)。 每次操作前及完成後，需清洗管線至少半小時以上，確保無殘留污染 MS分析條件已知或已找到參考資料 進入chemstation後，首先需check tune為pass才可進行以後之操作，否則立即通知精密儀器中心助理條件設定LC設定 液相條件 - 移動相的選擇 ump 4. Set up Injector 5. Set up DAD Signals B. MS設定條件參考 1.電噴霧2.化學電離(APCI)之3個基本步驟: 3.MS 霧化MS說明解析：四質量分析器有兩種掃描方式：質譜常用術語質譜圖相關概念 LC-API/CID/MS 5. MS解析規則與條件說明 6. API電離步驟及過程: 7. ESI 及APCI 最佳化條件 8.將現有的 LC方法改編為 LC/API-MS方法取離子圖建立校正表D. Report A. LC設定 通常填充物質的粒徑3-10 μm的管柱是可用的。10 μm的填充物不適合LC/MS分析，因峰擴散很大。粒徑3-5 μm的填充物是較理想的。5 μm管柱可能更適合掃描模式，其峰寬度會比較小粒徑的管柱寬。峰出現花費較少時間，可以有足夠掃描速度和掃描整個峰。如果數據採集太快，損失譜圖質量。3.5 μm管柱具有增加層析分辨率和靈敏度的優點。提高的分辨能力可更可靠地分離同分異構體。 根據實驗需要選擇Column的長度，對高流量簡單分析用短Column。總分析時間會較短，當為樣品時，需要較長Column的分離能力。液相條件 - 移動相的選擇 非揮發性的酸、鹼、鹽 = 揮發性的酸、鹼、鹽 Positive Ion ( pH 7.0；5 preferred)Negative ion (PH 5.0 ; 9 preferred) ●Acetic acid ●Formic acid ●Tri-fluoroacetic acid ●Ammonium hydroxide ●TEA (3) Post-column addition of acid or base may be used to adjust the pH if the chromatography wont work at the desired pH (4) 溶劑適用性Suitable for ES and APCl Suitable for only APCI MethanoI AcetonitriIe ; *Water Ethanol ; Propanol ; lsopropanoI ; ButanoI DMF(1) ; DMSO(1) Acetic Acid ; Formic Acid Acetone CH2C12 ; CHCI3 THF Toluene Benzene Hydrocarbons (e.g Hexane) Styrene CCl4 CS2 Cyclic Hydrocarbons (e.g Cyclohexane) (5)許多常規的HPLC溶劑適合於API-MS。較好的電噴霧溶劑將在溶液中保持離子。因此，如甲苯這樣的溶劑，在溶液中不會保持離子，不能用於電噴霧。雖然水是對離子極好的溶剎，但它的溶劑化能太高，去溶劑困難。 常用的LC/MS溶劑一般為高質量的甲醇乙睛水和揮發性添加劑，如甲酸乙酸甲酸銨和乙酸銨等。如果這些常規溶劑能滿足分析的需要，可不考慮其他溶劑。 層析Reversed phase *** ** Normal phase * *** p.s. Main compatibility problems: ions in solution are favorable for electrospray, but may lead to poor retention in reversed phase. High ionic strength and/or nonvolatile buffers may be hard to electrospray (8)ESI/APCI與HPLC的模式的相容性電噴霧有利於溶液中的離子。反相液相層析條件通常會抑制離子化，增加分子疏水性質。之後添加可用於克服這種類型的不相容性。樣品通常揮發性。電噴霧對正相分離不是很有用，在正相移動相中通常不會形成離子。而APCI可處理非極性移動相，非極性樣品通常較易揮發，因此正相層析可用於APCI。 以過濾形式的體積排阻層析與電噴霧相匹配。水相移動相和蛋白質樣品是很好的匹配。過濾