库仑电化学法快速测定单胺类神经递质的方法学研究.docVIP

　　库仑电化学法快速测定单胺类神经递质的方法学研究 作者：肖凤霞，邓少东，田青，邓超明1，周改莲 【摘要】 目的 建立库仑阵列电化学高效液相色谱法快速测定大鼠脑组织中的单胺类神经递质的含量。方法 采用库仑阵列电化学检测器检测去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5羟色胺(5HT)、5羟吲哚乙酸(5HIAA)，采用Phenomenex C18反相色谱柱(150 mm×4.60 mm，5 μm)，流动相为缓冲液乙腈(体积比87∶13)，流速为1 mL·min-1，柱温为35 ℃。结果 4种单胺类神经递质的最低检测限为0.015 15～0.018 15 ng ,回收率为85.3 %～100.5 %。结论 该法具有快速、准确、灵敏、样品制备简便等优点，可用于大鼠脑组织中单胺类神经递质的分离检测。 【关键词】 高效液相色谱法;单胺类神经递质;库仑阵列电化学检测器 　　(1.School of TCM,Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine,Guangzhou Guangdong 510006,China; 2.Taishan Medical University,Taian,Shandong 271016,China)Abstract:Objective To establish a rapid method for determining monoamine neurotransmitters in rats’ brain tissue by HPLC ed on a Phenomenex C18 column(150×4.60 mm,5 micron). The mobile phase,consisted of acetonitrileL·min-1. The column temperature ined.Results The minimum measurement limit ethod is rapid,accurate,highly sensitive and easy to operate. The procedure is suitable for determining the monoamine neurotransmitters in rats’ brain tissue. 　　Key onoamine neurotransmitters; coularray detector 　　单胺类物质包括去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5羟色胺(5HT)、五羟吲哚乙酸(5HIAA)等物质，是哺乳动物和人类中枢神经重要的信息传递物质。研究该类物质及其代谢产物在体内的含量变化，对于阐明药物在体内的作用机制，提供了有力的依据。尤其在老年痴呆症、抑郁症、儿童多动症、儿童多动秽语综合征等疾病与神经递质含量关系、药物 治疗 效果等方面的研究中，可提供非常有用的信息[1]。目前 　　2.4 线性关系考察 　　取混合对照品贮备液适量，置6个容量瓶中，分别加入0.1 mol·L-1 HCLO4稀释成不同质量浓度的系列混合对照品溶液，使所含各对照品的质量浓度分别为0.004、0.02、0.1、0.5、2.5、12.5 μg·mL-1,分别精密吸取15 μL 进样。以各组分的质量浓度(ρ)为横坐标,各组分的峰面积(A)为纵坐标进行线性回归,4种单胺类神经递质的线性关系考察结果见表1。表1 4种单胺类神经递质的线性关系考察结果 　　2.5 精密度试验 　　分别配制低(0.02 μg·mL-1)、中(0.5 μg·mL-1)、高(2.5 μg·mL-1)3种不同质量浓度的混合对照品溶液,分装后贮存于-80 ℃冰箱内。日内连续测5次, 计算 日内精密度;每份样本每日测5次,连续测定5日,计算日间精密度，见表2。 　　2.6 稳定性试验 　　取供试品溶液，分别于0、4、8、12、24 h进样10 μL，计算各组分峰面积积分值RSD值，分别为1.18%(NE)、3.55%(DA)、1.19%(5HIAA)、0.87%(5HT)，表明供试品溶液在4 ℃条件下放置24 h稳定性良好。 　　2.7 加样回收率实验 　　取大鼠脑组织,经预处理后测定峰面积。再取上述脑组织分别加入低(0.02 μg·mL-1)、中(0.5 μg·mL-1)、高(2.5 μg·mL-1)3种浓度的混合对照品溶液，按照“2.2.4”项下方法制备加样回收供试品溶液，依法测定，计算回收率，结果见表2。表2 回收率与日内、 日间精密度 　　2.8 检测限测定 　　取“2.4”项下配制的混合对照品溶液(0.004 μg· mL-1)不断用0.1 mol·L-1 HCLO4稀释，