Chap-7-基因工程原理与技术-PCR技术原理.pdf

基因工程原理与技术 The Principles Technology of Genetic Engineering 张金文 甘肃农业大学农学院 2010年3月 第七章 PCR原理和技术 第一节 PCR技术简史 第二节 PCR原理 第三节 PCR反应体系和程序 第四节 PCR引物设计 第五节 PCR产物的克隆和鉴定 第六节 PCR技术的拓展 第七节 PCR技术的应用 基因工程原理与技术 张金文 主讲 2 历 史 • DNA的复制 20世纪60s-70s，基因的体外分离技术。 • 核酸体外扩增的设想 核酸体外扩增最早设想： • 聚合酶链反应的发明 1971年，Khorana提出：经过DNA变性，与合 适引物杂交，用DNA聚合酶延伸引物，并不 断重复该过程便可克隆tRNA基因。 但由于测序和引物合成的困难，以及70年代 基因工程技术的发明使克隆基因成为可能， 所以，Khorana的设想被人们遗忘了…… 基因工程原理与技术 张金文 主讲 3 很少有在公司工作的科研人员得 很少有在公司工作的科研人员得 诺贝尔奖， Mullis是其中之一 诺贝尔奖， Mullis是其中之一 故事发生在1983年的春夏之交 发明过程：Mullis在 “偶然想出的聚合酶链反应”一文中写 到: “这种简单得令人惊奇，可以无限量地拷贝DNA片段的方法 是在不可想象的情况下，即驾车行驶在月色下的加利福尼亚山 间公路上时想出来的”。 Mullis开车的 Mullis (1944 -)，在 Cetus公司工作期间，发 时候, 瞬间感 明了PCR。 觉两排路灯就 他原本是要合成DNA引 是DNA的两条 物来进行测序工作，却 链，自己的车 常为没有足够多的模板 DNA而烦恼。 和对面开来的 1983年春夏之交的一 车象是DNA聚 个晚上，他开车去乡下 合酶，面对面 别墅的路上萌发了用两 地 合 成 着