金黄色葡萄球菌A蛋白（Staphylococcal.PDFVIP

金黄色葡萄球菌 A 蛋白 Staphylococcal Protein A 泰天河生物 金黄色葡萄球菌 A 蛋白(Staphylococcal Protein A、简称 SPA) 5．去封闭作用 固相SPA能部分去除肿瘤病人和带瘤动物血清中的封闭活性，从而降低了血清 SPA 是细胞壁抗原的主要成分，几乎 90% 以上的菌株均含有这种成分，但不同的菌株含 对淋巴细胞介导的细胞毒的封闭作用。 量差别十分悬殊。SPA 占整个细胞壁蛋白成分的6.7%，通过胞壁肽聚糖以共价键与之结合。 SPA的应用 其它葡萄球菌如表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌不含 SPA 。 SPA应用很广，但所有应用的原理都离不开SPA具有与IgG的Fc段的结合能力，主要应用方面 该的重组金黄色葡萄球菌蛋白A是大肠杆菌生产的基因工程产品，具有极高Fc段结合活性, 如下： 性能稳定，易于纯化等优点。 重组蛋白A还可与多种报告分子（荧光染料、酶标记、生物素、 1．SPA菌的协同凝集作用 胶体金、放射性标记等）偶联并不影响其与抗体结合的活性。这些偶联反应可用于组织化学、 用已知的标准血清，吸附到SPA菌的表面,使之成为吸附抗体的载体,再以此去诊断相应的未知 Western杂交、ELISA试验等的抗体检测。另外，重组蛋白A还可固定于固体支持物上用于单克 抗原而产生肉眼可见的凝集颗粒,诊断的抗原可以是颗粒性的,也可以是可溶性的。此种凝集相 隆抗体或多克隆抗体的纯化。 当于反向间接血凝,但省去间接血凝中的抗体纯化,红血球鞣化等复杂手续,而只需要 SPA菌体 SPA的免疫学性质(见表1. 对Protein A和Protein G的相对结合强度) 及粗制免疫血清即可。所以此法简单、快速,特异性敏感性均较满意。目前已用于许多细胞和病 金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)能与人及多种哺乳动物血清IgG分子中的Fc片段结合，结合的 毒的检测及分型。协同凝集只适用于检测抗原，未见应用于检测抗体的报道。 亲和性次序依次是猪、狗、兔、人、猴、鼠、小鼠及牛；对大白鼠、绵羊的亲和力差；对马、 2 ．作为广谱第二抗体 用SPA代替抗体IgG的第二抗体，有如下优点：①SPA制备容易，性质 犊牛、山羊等无亲和力；对所有的鱼类、两栖类、爬行类、鸟类（除少数例外）均不能与之结 稳定，易纯化，对人和多种哺乳动物的IgG都能应用,不受种属限制。而第二抗体的制备比较麻 合。鸡的IgG必须与相应的抗原形成复合物才能与SPA结合，原因可能是Ag －Ab复合物改变了 烦，且需多次免疫动物，在应用上要受同种属的限制；②SPA的结合力强，相当于游离抗体与 IgG的Fc片段的构象。SPA与IgG结合的亚类主要是IgG1、IgG2和IgG4。 SPA 除与IgG结合外， 抗原的结合力，对人和兔的亲和常数均为103 L/克分子，结合后对IgG的活性无影响。无论在0 还能与血清中少量的IgM和IgA结合，SPA菌对各类免疫球蛋白的吸附率：IgG为90%～98%， ℃、37℃、44 ℃及56℃几乎均能立即结合而无需长时间的孵育，因此可以缩短试验时间，第 IgM为2%～30%，IgA为1.5%～20% 。 出现共沉反应的SPA与IgG必须有两个结合部位，它们 二抗体在较长的孵育中，出现抗原分解的问题也可以得到解决；③SPA容易标上125 I、荧光素、 分别在Fc和Fab段上,缺一虽能与SPA结合，但不出现共沉反应，这种Fab的参与并非SPA－抗 辣根过氧化物酶、铁蛋白等，因此可与多种技术相结合；④在检查细胞上的病毒抗原时，第二 体反应。现已研究表明，IgG与SPA的结合部位是CH2和CH3的交界处。 抗体往往特异性不强，会非特异性地与细胞膜上的Fc受体结合。SPA分子高度均一，它不是免 SPA的理化性质