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HIV-1 P24抗原检测方法研究进展 关键词： P24抗原；酶免疫测定法；检测方法 33个年头,全球艾滋病流行与防治形势都发生了巨大的变化。自上世纪九十年代中期高效联合抗逆转录病毒治疗（highly active antiretroviral therapy,HAART）技术应用以来,成千上万的艾滋病病人得到有效治疗。然而，由于HIV本身的高变异率，导致临床上尚无有效的根除HIV的治疗方法。因此，对艾滋病的防控手段仍以预防为主。目前，对HIV感染的检测方法包括抗体检测、P24抗原检测、核酸检测以及CD4+T淋巴细胞水平检测等。由于从感染HIV检测的A试剂经历了4代发展[1] 期”问题仍不可避免；而可以进一步缩短“窗口期”问题的核酸检测和CD4+T淋巴细胞水平检测，由于其检测过程较复杂 HIV-1侵入人体后，核心抗原 1 P24抗原的生物学特性 nm的球形颗粒，由核心和包膜两部分组成。核心包括两条单股120(外膜糖蛋白)和gp41(跨膜糖蛋白)两种糖蛋白。,含有3个结构基因（gag,pol和env）毒粒蛋白表达调节因子病毒r蛋白毒粒感染性因子变异程度各不同。其中以env基因的变异率最高，gag和pol基因相对保守。Gag基因编码55kd的前体蛋白，在pol基因编码的蛋白酶的加工下产生 2 P24抗原的检测方法 2.1 ELISA检测a。首先以P24单克隆抗体包被微孔板，加人待检标本孵育，待检标本中若存在P24抗原，则被“捕捉”结合于包被抗体，然后依次加入生物素化的抗．HIV多克隆抗体、链亲合素化的辣根过氧化物酶和反应底物显色，最后用酶联免疫检测仪测定OD值判断结果。标准P24抗原检测方法的阳性检出率相对较低，在无症状携带者中通常仅为8％一10％，在艾滋病相关综合征(AIDS-relatedcomplex，ARC)患者中为12％，在AIDS患者中为37％一86％。这种低检出率可能与感染早期P24核心抗原量较少，以及在病情发展阶段P24抗原与抗体形成抗原抗体复合物阻碍了抗原的检测有关。改进标准的方法或设计新方法，可以增强检测的敏感性，提高阳性检出率。目前开发的第4代H1V诊断试剂就是在第3代试剂的基础上，加入了HIV-1P24抗原检测系统，可同时检测血清／血浆中的HIV-1抗体和P24抗原，使诊断窗口期与第3代ELISA检测试剂相比，平均缩短了4d，使艾滋病早期诊断的效果明显优于第3代。既便如此，第4代试剂仍然有2-3周的诊断窗口期。此外，由于抗原和抗体同时包被在反应板上，存在着相互干扰的可能，影响了免疫反应的特异性，再加之第2窗口期的存在，影响了检测的敏感性。因此通常来讲，使用第4代试剂检测P24抗原，其灵敏度[(20-l00)pg/m1]远远低于单独检测抗原抗体分析法[(3.5-10)pg/m1]。从方法学上来讲，这种基于ELISA的分析方法，灵敏度终归是有限的，相对化学发光和时间分辨荧光免疫分析技术等更为先进的分析方法，其灵敏度仍较低[2-5]。 2.2 P24抗原检测的新方法 由于ELISA本身的局限性以及P24抗原检测在HIV-1诊断中的重要作用，近几年来国内外对建立高灵敏度检测P24抗原的研究一直就未曾停止过。先后研发了免疫复合物解离P24抗原测定法(immune-complex disassociate，ICD)，信号放大增强ELISA(signal-amplification-boosted ELISA)，超敏感酶免测定法(ultrasensitive enzyme immunoassay，UEI)，免疫吸附电镜法(immunosorbent e1ectron microscopical method，ISEM)和纳米粒子生物条形码检测技术(nanoparticle-based biobarcode amplification assay，BCA)等新方法。 2.2.1 ICD与信号放大增强ELISA近年来发展起来的ICD分析方法，是指用酸、碱或加热的方法使免疫复合物发生解离。常用的方法是用热处理将血清中免疫复合物解离后，再进行测定，从而提高检测血清中P24抗原的敏感性和阳性检出率。SchUpbach[6]等分别用热处理和酸化的方法解离免疫复合物后用ELISA检测，发现其阳性率由26.5％分别提高到67.8％和53.1％。信号放大增强ELISA是利用生物素标记的Tyramide扩增信号，然后使用偶合有荧光素的亲和素进行检测，它是基于TSA信号放大系统的ELISA检测方法，其灵敏度远远高于普通ELISA。2003年，Sutthent等[7]将免疫复合物热解离后通过TSA信号放大系统的ELISA使P24抗原检测的最小检出值由原来的10ps/ml降至0．5pg/l，