化妆品防腐效能评价方法操作指南.PDFVIP

化妆品防腐效能评价方法操作指南 化妆品防腐效能评价比较常用的方法是微生物挑战性实验。其基本原理是：将一定量的微生 物加入到化妆品中，每隔一定时间检测微生物增减的数量，以此来判断防腐剂的防腐效能。通过 该方法既可以评价防腐剂的效能，又能在安全剂量内确定化妆品使用的防腐剂的最低浓度。 微生物挑战性实验可采用单一培养或混合培养方式。单一培养即分别接种每种实验菌株的菌 悬液于测试化妆品中，在接种后的一定时间内对化妆品进行平板计数（APC ），以此判断防腐剂的 防腐效能。混合培养为将几种细菌或真菌的混合液接种于化妆品中，在接种后一定时间内，测定 化妆品的APC ，以此判断防腐效能。可根据实际情况选择培养方式 挑战性实验测试菌株的选用原则为：尽量覆盖革兰氏阳性、阴性细菌，酵母菌和霉菌至少各 一种，并且对各防腐剂抵抗性较高，能代表化妆品中可能污染的微生物对防腐剂的抵抗性的菌株。 可根据化妆品的性质，生产、使用环境等增加菌株。一般较常用的菌株为金黄色葡萄球菌、大肠 杆菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌和黑曲霉等。 检测时间：一般为在样品中加入微生物时，以及第1、7、14、21 、28 天检测化妆品中的菌落 数。 判定标准：推荐采用《欧洲药典》的结果评定标准，即细菌于第7 天时菌落总数下降99.9%， 至第28 天时无增长；真菌于第14 天下降99.0%，至28 天时无增长，判断为防腐效果良好。 对于能够保证化妆品产品微生物质量合格，且在使用过程中不存在二次污染的化妆品可以不 进行微生物挑战性实验。 化妆品防腐效能评价方法 1. 定义 微生物挑战性实验：将一定量的微生物加入到化妆品中，每隔一定时间检测微生物增减的数 量，以此来判断防腐剂的防腐效能的实验方法。 2 仪器设备 2.1 生物安全柜 2.2 高压蒸汽灭菌器 2.3 冰箱 2.4 恒温培养箱 2.5 均质器 2.6 旋涡振荡器 2.7 天平 2.8 灭菌培养皿 2.9 灭菌试管 2.10 灭菌刻度吸管 2.11 灭菌试剂瓶 2.12 玻璃珠 3.试剂和培养基 3.1 生理盐水 3.2 含0.05%吐温80 的生理盐水 3.3 改良的 LETHEEN 肉汤 3.4 水解大豆琼脂培养基（TSA 培养基） 3.5 马铃薯葡萄糖培养基（PDA ） 3.6 萨布罗右旋糖琼脂培养基(SDA) 4.实验菌株 4.1 细菌：金黄色葡萄球菌ATCC6538 ，大肠杆菌ATCC8739 ，铜绿色假单胞菌ATCC9027 。 4.2 真菌：黑曲霉ATCC16404 ，白色假丝酵母ATCC10231 。 根据实际情况可增加其他细菌作为测试菌株。 5.实验方法 5.1 样品准备：取包装完好的待测化妆品样品2 份，在无菌条件下各称取30g 于灭菌试剂瓶中，备 用。 8 5.2 细菌悬浊液的制备：制备3 种细菌菌悬液，浓度为10 cfu/mL 。 8 5.3 真菌悬浊液的制备：制备白色假丝酵母菌悬液和黑曲霉孢子悬液，浓度为10 cfu/mL 。 5.4 菌液接种及样品检测：取上述称量好的化妆品（30g），分别加入0.3mL 混合细菌悬浊液和0.3mL 混合真菌悬浊液，用旋涡振荡器混合均匀，将样品于室温（22.5+2.5℃）保存，并分别于0、1、 7、14、21、28 天检测化妆品中的菌落数，即取1g 或1mL 待测样品加入到9mL 改良的LETHEEN 肉 汤中，充分混匀稀释成适宜的倍数，检测样品中菌落数。每次检测做两个平行样。 5.5 结果计数：按 《化妆品卫生规范》（2007 ）中菌落计数方法进行计数。 5.6 评价方法： 1 菌落数下降的百分数 （%）= （A -A ） ×100% 0 n A0 式中： A ──为初始加入微生物时化妆品中微生物的含量，单位为cfu/g 或mL；