卵清白蛋白提取.pptVIP

卵清白蛋白提取的工艺 组员：阮金丽 刘碧娇 魏徐丽 梁倩萍· 蛋清中各种蛋白的理化性质 工艺流程 材料和试剂 新鲜鸡蛋 Q-Sepharose F.F 凝胶G-25 Tris-HCl(20mmol/L) HCl （1M）NaOH（1M） Tris-HCl(20mmol/L,pH8.0) NaCl （0.15M） 仪器设备 离心机 紫外检测仪 色谱柱 分离蛋清 将新鲜鸡蛋洗干净，敲碎蛋壳（大头），小心分离出蛋清和蛋黄，取蛋清 预处理 1 将蛋清缓慢搅拌（以不引起泡沫为准）至胶状部分破坏用蛋清两倍体积的20mmol/LTris-HCl稀释（取样SDS测蛋白含量） 2 用1mol/L的HCl调pH至6.0，在2℃条件下缓慢 搅拌3h，以沉淀伴清蛋白 3 在4℃、转速为6000r/min条件下，离心5分钟去 除沉淀； 4 上清液用1mol/LNaOH调整到pH8.0， 在4℃，转速15000r/min条件下，离心30min，沉淀卵黏蛋白，取上清液备用。 离子交换 Q-Sepharose F.F阴离子柱分离 1 溶胀在体积分数为20%乙醇中的强阴离子填料Q-SepharoseFF搅匀，取所需量，静置 2 用pH8.0的20mmol/L的Tris-HCL起始缓冲液置换20%的乙醇溶液3-5次，最终缓冲液与胶体的体积比为1：3备用。 3 将Q-SepharoseFF装入色谱柱中，最终体积为40mL。 用20mmol/LTris-HCL（pH8.0）平衡色谱柱 上样 将蛋清制备液以3mL/min加入Q-SepharoseFF色谱柱中 待吸附饱和后，用20mmol/LTris-HCL（pH8.0）缓冲液冲洗未结合到Q-SepharoseFF 色谱柱上的蛋白，直到记录仪记录线回到基线 7 洗脱 用含0.15mol/LNaCL的20mmol/LTris-HCL（pH8.0）进行洗脱，收集各洗脱液 脱盐 凝胶柱层析脱盐 称取凝胶G-25 30g，用0.02mol/L的PBS （pH8.0）500mL热溶胀2h 平衡 用0.02mol/L PBS（pH8.0）40mL倒进 柱，排气泡 3 装柱 待 PBS流出20-30min后 4 上样 上样量为床体积的30% 洗脱 用0.02mol/L PBS（pH8.0）控制速 度，保证凝胶上方液面高度为10㎝ 6 收集洗脱液 收集，检测 收集洗脱液 SDS检测卵清白蛋白的纯度 自己好好看一下，一定要弄清楚每一步的作用，要思考！ SDS的操作步骤以及所用溶液的配制方法自己找哦。用到层析技术的，装好柱后如何测柱效？结合分离或者仪器分析的课本即可找到相应的资料。加油哦！里面有些参数不一定都是正确的。 * 不同 4.7 10.7 4.0-4.3 6.6 4.5 等电点 不同 18(α ) 400(β) 14 28 78 45 分子量KDa 1.0% 1.5% 3.5% 11% 13% 52% 比例 免疫球蛋白 卵粘蛋白 卵类粘蛋白 溶菌酶 伴清蛋白 卵清蛋白 名称 分离蛋清 离子交换层析 脱盐 预处理 收集，检测 *