实验3 乙酰丙酮显色法测定血清甘油三酯.pptVIP

表2-3 乙酰丙酮显色法测定甘油三酯 加入物（ml） 空白管 标准管 测定管 血清 － － 0.2 标准液 － 0.2 － 蒸馏水 0.2 0.2 － 抽提剂 2.5 2.3 2.5 40mmol/L H2SO4 0.5 0.5 0.5 边加边摇，使之充分混匀，静置分层后，分别准确吸取上清液于另外3支试管中 上清液 0.3 0.3 0.3 皂化剂 1.0 1.0 1.0 充分混匀，56℃水浴保温5min 氧化剂 1.0 1.0 1.0 显色剂 1.0 1.0 1.0 2．血清TG降低 比较少见，慢性阻塞性肺疾患、脑梗死、甲状腺功能亢进、营养不良和消化吸收不良综合征等可引起血清TG的降低。 注意事项 5．每一批测定都应该同时做标准对照。 6 ．超出此线性范围或血清明显混浊，可用生 理盐水作倍比稀释后再测。 7．以血浆作标本时，应注意抗凝剂的影响。 通常使用EDTA·K2（1mg/ml）作抗凝剂。 8．取血后应及时分离血清（或血浆）。 * * 全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验实验指导 （第二版） * 全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验实验指导 （第二版） 实验3 乙酰丙酮显色法测定血清甘油三酯 湘南学院医学检验系 蒋显勇 实验 3 乙酰丙酮显色法测定血清甘油三酯 实验目的 掌握：乙酰丙酮显色法测定血清甘油三酯基本原理。 熟悉：本法的操作过程与血清甘油三酯的参考范围。 了解：血清甘油三酯测定对家族性脂类代谢紊乱等疾病诊断的临床意义。 实验原理 血清甘油三酯（triglyceride，TG）经正庚烷-异丙醇抽提，然后用氢氧化钾皂化，所生成的甘油再被过碘酸钠氧化为甲醛，后者在铵离子存在下与乙酰丙酮反应，生成带荧光的黄色物质即3,5-二乙酰-1,4-二氢二甲基吡啶（Hantgsch反应），颜色深浅与血清甘油三酯浓度成正比。与同样处理的标准液比较，求得其含量。 试剂与器材 1．抽提液 2．40mmol/L H2SO4溶液 3．皂化剂 4．氧化剂 5．显色剂 6．2.26mmol/L三油酸甘油酯标准液 操作步骤 计算 加试剂后充分混匀各管，56℃水浴保温25 min，取出冷却，用分光光度计比色，于415 nm波长处，以空白管调零，测出各管的吸光度。 参考范围 正常人TG水平高低受生活条件的影响，我国人低于欧美人，成年以后随年龄上升。TG水平的个体间差异比总胆固醇（TC）大，人群调查的数据比较分散，呈明显正偏态分布。 我国《血脂异常防治建议》提出的判断标准： TG ＜1.70mmol/L（＜150mg/dl）为理想范围； TG ＞1.70mmol/L（＞150mg/dl）为升高。 临床意义 1．血清TG增高 见于各种原因所致的高TG血症。 高TG血症有原发性与继发性两类. 原发性高TG血症多有遗传因素，其中包括家族性高TG血症与家族性混合型高脂血症等。 继发性高TG血症见于糖尿病、糖原累积病、甲状腺功能减退、肾病综合征、妊娠、口服避孕药、酗酒等。 注意事项 1．吸取上层液时要注意，不可吸到下层，否则易浑 浊。 2．血清TG易受饮食的影响。 3．加样后要立即比色 4．本方法所用试剂较稳定，室温下可保存半年，分 装使用可避免因试剂污染而引起的空白值升高。 评价 本法测定范围较宽，在0.28mmol/L～12.93 mmol/L之