电泳仪和毛细管电泳仪精选.pptxVIP

电泳仪和毛细管电泳仪;第一节 电泳;电泳发展简史;20世纪50年代，出现支持物的区带电泳;目前，电泳技术在生物大分子尤其是蛋白质和核酸的分离、分析和鉴定上具有巨大优势。 生物化学与分子生物学的“常规武器”及常用工具。;电泳原理;一、电泳迁移率（Electrophoresis mobility） ; 根据Stoke公式:;电泳迁移率或电泳淌度（?）; ;二、 影响电泳速度的因素;3. 溶液的pH值;4. 溶液的离子强度 I;1). 双电层;2).电渗流（EOF）;电渗流方向;电渗流形状;电渗流的大小;;6. 吸附作用（介质对样品的滞留作用）;电泳方法; 特点： 对蛋白质吸附小，消除拖尾现象 分离速度快 电泳时间短 样品用量少 ;特点：机械强度好、弹性大、透明、 化学稳定性高、无电渗作用、设备简单、 样品量小、分辨率高 ;利用pH值梯度介质，分离等电点不同的蛋白质; 采用两种不同浓度的电解质组成，一种为前导电解质，充满整个毛细管柱；另一种为尾随电解质，置于一端的电泳槽中。前导电解质的迁移率高于任何样品组分，后者则低于任何样品组分，被分离的组分按其不同的迁移率夹在中间，在强电场的作用下，各被分离组分在前导电解质与尾随电解质之间的空隙中移动，实现分离。 ;（六）双向凝胶电泳（二维电泳） ;27;IEF流程图;双向电泳原理第二向：SDS;;双向电泳; (七）免疫电泳;33;第二节 电泳仪的临床应用;二、尿蛋白电泳 临床进行尿蛋白电泳的主要目的是：①确定尿蛋白的来源；②了解肾脏病变的严重程度（选择性蛋白尿与非选择性蛋白尿），从而有助于诊断和预后的判断。当 不能进行肾活检时， 尿蛋白电泳结果能 很好地协助临床判断 肾脏的主要损害。 ; 三、血红蛋白及糖化血红蛋白电泳 应用电泳法鉴别患者血液中Hb的类型及含量，对于贫血类型的临床诊断及治疗具有重大意义。Hb电泳结果应根据不同年龄人群进行分析。 ;四、免疫固定电泳 可对各类Ig及其轻链进行分型，最常用于临床常规M蛋白的分型与鉴定。一般用于单克隆Ig增殖病、单克隆Ig病、本周氏蛋白和游离轻链病、多组分单克隆Ig病、重链病、 CSF寡克隆蛋白鉴 别、多克隆Ig病的 诊断和鉴别诊断。; 五、 同工酶电泳 同工酶电泳用于临床上常见的同工酶或同工酶亚型分析。 1．乳酸脱氢酶(LD/LDH)同工酶： 2．肌酸激酶（CK）同工酶： 3．CK同工酶亚型： ; 六、脂蛋白电泳 脂蛋白电泳检测各种脂蛋白（包括胆固醇和甘油三酯）主要用于高脂血症的分型、冠心病危险性估计，以及动脉粥样硬化性及相关疾病的发生、发展、诊断和治疗（包括治疗性生活方式改变、饮食及调脂药物冶疗）效果观察的研究等。;第三节 高效毛细管电泳（HPCE）;所用分离柱的柱径大，柱较短，分离效率不高（远低于HPLC），温度影响大。;HPCE的特点：;HPCE的基本工作原理;缓冲液充满毛细管柱;0～30KV; 200~300μA;毛细管电泳的分离模式;1.毛细管区带电泳;毛细管种类;;Hydrodynamic flow Parabolic Resistance to flow at surface More diffusion/broader detection zone;电渗流是CE中最大的驱动力来源之一;电渗流的正面及负面作用;影响电渗流的因素;电渗流随pH的变化情况;控制电渗流的三个重要手段;缓冲溶液的影响和选择;常用的CE缓冲体系; 2.毛细管凝胶电泳;CE双链及单链核酸分析;CE-SDS蛋白分子量分析;3.毛细管胶束电动色谱;毛细管胶束电动色谱原理;;;七种青霉素的分离;胶束电动色谱的特点; 4.毛细管电色谱(CEC);能够分离不带电荷的物质。 不需要压力泵系统的情况下，提供了微量体积试样溶液的高效分离?通过电渗流泵，而不是通过机械输送流动相通过固定相的。简化了输送体系。 电渗泵产生的是塞子式流动轮廓，而不是流体动力学轮廓，因此毛细管电色谱的分离柱效比高效液相色谱法高。; 1. DNA分析 DNA分析包括碱基、核苷、核苷酸、寡核苷酸、引物、探针、单链DNA、双链DNA(DNA片段、PCR产物)分析及DNA序列测定。CZE和MECC通常用来分离碱基、核苷酸、简单的核苷酸等。CGE则用于较大的寡核苷酸、ssDNA、dsDNA和DNA序列分析。已有CE测定DNA序列的商品仪器面市，但快速测定DNA序列仍在研究中。 ; 2. 肽和蛋白