紫外可见分光光度计课件..pptVIP

课件紫外－可见分光光度计 化学工程系 09工业分析与检验 实验目的 仪器认识 1、紫外－可见分光光度计 2、仿真仪器 3、比色皿 4、擦镜纸 紫外分光光度计UV-754C 主要结构 检测器 工作原理 1、 在分子中，除了电子相对于原子核的运动之外，还有原子核之间振动和转动引起的相对位移。这三种运动能量都是量子化的，对应有一定的能级。分子的能量是这三种能量的总和。当用一定频率（波长）的电磁波（光）照射分子，其能量恰好等于分子的两个能级差时，则分子就会吸收光的能量而由较低的能级跃迁到较高的能级，同时光的强度（能量）变小。吸光度符合吸收定律： A=lg（I0/It）=-logT 2、 根据这一关系可以用工作曲线法来测定未知溶液中吸光物质的浓度。 基本原理 一、了解光的基本特性 （1）光的波动性。光是一种电磁波v=1/T=c/^ 6=1/^=v/c （2）光的粒子性E=hv=h*c/^ E：能量，单位焦耳，h：普朗克常量6.626 x 10^-34J/s （3）单色光、复合光、互补色光 二、光的吸收谱曲线和光吸收定律 1、光强度：光强度市直单位时间内照射在单位面积上的光的能量。用字母 I 表示，它与单位时间照射在单位面积上的光子的数目有关，与光的波长没有关系 2、透射率：T=It/I0 T愈大，物质对光的吸收愈少，T=0%，光全部被吸收，T=100%，表示光全部透过 3、吸光度：A=- logT= log I0/It ，A越小，物质对光的吸收越少；A=0，表示光全部透过；A=无穷，光全部吸收 4、郎伯-比尔吸收定律 A=k1b k1：比例系数，b：液层厚度——郎伯定律 A=k2c k2：比例系数，c：溶液浓度——比尔定律 A=kbc 注:紫外：10~400nm，可见光：400~750nm，红外：0.75~1000um r射线最短，频率最高，能量最大；无线电波则相反。 常用术语 1、红移和蓝移 红移：使化合物的吸收峰向长波长方向移动的现象称为红移。不饱和键之间的共轭效应、引如助色团或改变溶剂的极性，都会引起红移现象。 蓝移：使化合物的吸收峰向短波长方向移动的现象称为蓝移。改变溶剂的极性会引起蓝移现象。 2、生色团和助色团 生色团：通常把含有pai键的的结构单元称为生色团，如乙烯基、乙炔基。 助色团：通常把含有未共用电子对的杂原子基团称为助色团。 影响紫外—可见吸收光谱的因素 1、共轭效应：非共轭时，各个生色团独立吸收光，对应吸收带的波长及吸收强度相互影响不大；共轭时，由于pai电子运动范围增大，吸收光谱产生红移，且共轭不饱和键数目越多，红移现象越显著 2、溶剂效应：当溶剂极性增大时，溶质与溶剂的相互作用增强 3、溶液pH:在不同的pH溶液中，分子或离子的解离形式可能发生变化，光谱形状、吸收强度可能不一样 紫外可见分光光度计用法简要过程 1、开机 2、调零 3、测样 4、断开连接 5、注意事项 开机 打开电脑以及分光光度计。 软件的打开：直接点击图标，然后从菜单栏，文件——打开，找到相关标线打开。（另一种方法，从我的电脑——紫外——找到标线打开） 点击connection，机器自检，待自检结束，点击“OK”（若实验前机器处于打开状态就不会出现自检） 调零 首先在里面一个通道放装有蒸馏水的比色皿（放入比色皿后一定要把盖关闭），调零。然后再外面一个通道放装有蒸馏水的比色皿，观察吸光度，选择最小的一个，然后再次调零。（多点几次调零键，以确保调零） 测样 ：用选择好的比色皿测试，首先用要测得样品润洗比色皿两到三次。然后倒入样品（注意，拿比色皿时，不要碰到光滑面，用手指捏住毛面即可，倒液体尽量不要溢出到光面，如有溢出，用擦镜纸擦干，观察，没有水珠和痕迹，再放入通道中。以免影响吸光度。） 在数据栏，ID栏敲入数字编码，然后把光标放在浓度或者吸光度栏，点击read，得吸光度。（测样品时应多取几次样品做平行，直到结果数字相近）测量结束后，保存数据并把数据抄录下来，做进一步的计算分析 断开连接 ，点击unconnention。一次关闭分光光度计，电脑。关掉电源。用蒸馏水清洗用过的比色皿，放回原处。把实验台上整理干净。 注意事项 注意：1，离心分离时要选择一样的管，并且倒入相同的样品。 2，实验过程要做好详细记录。 3，实验结束把用过的仪器，器皿，清洗干净，烘干 紫外—可见分光光度法的应用 一、定性分析 1、未知化合物的定性鉴定：不同化合物往往在吸收光谱的形状、吸收峰的数目、位置和相应的摩尔吸光系数表现出特征性，可采用光谱比较法进行定性 2、有机化合物的结构推断：紫外—可见分光光度法可以进行化合物某些特征集团的判别