病原菌.ppt

实验2 凝固酶实验 方法（试管法）：用接种环取葡萄球菌3次，研磨于1：2稀释的抗凝血浆，置37温箱1-4h，血浆呈胶冻样凝块的为阳性反应（有溶血环的细菌），血浆仍为液体的为阴性反应（没有溶血环的细菌）。 玻片法：取两滴抗凝血浆，分别滴于载玻片上，做好标记，分别用接种环挑取溶血与非溶血细菌，将细菌沿血浆液边上研磨后，再与血浆混合。静置片刻，观察结果即可。 实验3 甘露醇发酵实验 原理：金黄色葡萄球菌能分解甘露醇产酸使甘露醇发酵管内的pH值降低。溴甲酚紫是敏感的酸碱指示剂，可以用它的颜色变化检测甘露醇发酵管的pH值改变。溴甲酚紫在pH值大于6.8时为紫色，当pH值小于5.2时为黄色。 SS琼脂 为强选择性培养基，主要用于分离鉴别病原性沙门氏菌（Samonella）和志贺氏菌（Shigella），培养基中煌绿、胆盐、硫代硫酸钠、柠檬酸钠等能抑制非肠道细菌生长。主要用以分离鉴定病原性沙门氏菌。沙门氏菌和志贺氏菌因不能发酵乳糖，故形成的菌落呈透明橘黄色或白色。大肠杆菌能分解乳糖而产酸，使胆盐以胆酸形式析出，因而形成中心浑浊的深红色菌落，柠檬酸铁能使产生硫化氢菌的菌落中心呈黑色，硫代硫酸钠具有缓解胆盐对沙门氏菌的有害作用，并中和煌绿、中性红染料的毒性作用，且能使大肠杆菌的红色菌落颜色更加鲜明。 双糖铁培养基---产酸产气实验 用以鉴定细菌对葡萄糖、乳糖的发酵作用和是否能产生硫化氢。若细菌能发酵乳糖/蔗糖，则培养基呈黄色（酸性反应）。若细菌能产生硫化氢，则应形成硫化铁而使培养基变黑。能产气的细菌可使底层琼脂内含有气泡。 * * 免疫微粒技术是利用高分子材料合成一定粒度大小的固相微粒为载体，包被上具有特异性亲和力的各种免疫活性物质（抗原、抗体或配体），使其致敏为免疫颗粒，用于免疫学和其它生物学检测与分离的一项技术。 作为载体的微粒通常为惰性微粒。如聚苯乙烯胶乳微粒、羧化聚苯乙烯微粒、磁化微粒、脂质体微粒和标记微粒（核素、荧光素或酶标记）。将制备好的微粒与抗原（或抗体）经物理吸附、化学偶联及生物素-亲和素桥联法等质敏方法形成免疫微粒。广泛应用于各种可溶性大分子的检测、分离和纯化、细胞标记与识别等。 免疫微粒技术 1：乳胶微粒免疫检测技术 原理：乳胶凝集实验的原理与间接凝集实验相同，将可溶性抗原（或抗体）致敏乳胶微粒，形成的免疫乳胶（immunolatex）可与相应的抗体（或抗原）结合，发生特异性凝集反应。 1：乳胶微粒免疫检测技术—以测定人促绒毛膜性腺激素（HCG）为例 1材料与试剂 家兔抗HCG血清；HCG致敏乳胶；待测尿液标本。 操作步骤 在黑色背景的玻片上滴加待测尿液和抗HCG血清各一滴混匀，再加入HCG致敏乳胶一滴，晃动混匀2-3min。肉眼观察出现明显凝集现象者为阴性，未出现凝集，仍保持均一的浑浊状者为阳性。必要时可将尿液标本做一系列等倍稀释，进行半定量检测。 磁性微粒（magnetic microspheres，MMS）是用高分子材料和金属离子如Fe3O4为原料，聚合而成的一种以金属离子为核心，外层均匀地包裹高分子聚合体的固相微粒。在液相中，受外加磁场的引力作用，MMS可快速沉降而自行分离。将特异性材料包被制成免疫MMS（IMB），与检测中的抗原结合形成免疫IMB-靶分子（或靶细胞）复合体，通过外加电场的作用即可与其它成分区别开来。近年来发展起来的磁性免疫PCR（MIPA）法已用于检测人类粪便中的沙门氏菌。MIPA用特异性单抗和特异性引标记的物，扩增产物用碱性磷酸酶标记的探针检测，具有较高敏感性。 2：免疫磁性微粒检测技术 实验五 病原性球菌 【目的要求】 1、掌握病原性球菌的形态及培养特性。 2、熟悉病原性球菌的分离与鉴定程序。 实验六 病原性杆菌 【目的要求】 1、掌握病原性杆菌的形态及培养特性。 2、熟悉病原性杆菌的分离与鉴定程序。 在血琼脂平板上，致病性葡萄球菌的菌落周围有透明的溶血环，该现象可作为致病性葡萄球菌和非致病性葡萄球菌判断的重要依据。 实验1：Gram染色：在玻板上做好标记，分别滴一小滴生理盐水，取溶血和非溶血性细菌，紧急烘干后，有菌膜出现，在火焰过火三次固定，加A液初染，1min，水冲洗，加B液媒染，1min，水冲洗，加C液脱色，30sec，水冲洗，加D液复染，30sec。 原理：血浆凝固酶是一种能使人或兔血清发生凝固的酶,金黄色葡萄球菌血浆凝固酶呈现阳性反应，而其它两种血浆凝固酶为阳性反应。 甘露醇发酵实验 在生化反应中，金黄色葡萄球菌的甘露醇发酵实验为阳性，而表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌的甘露醇发酵实验为阴性。 作业书写格式： 实验名称：脓汁中病原菌的分离和鉴定 实验目的：熟悉脓汁中病原菌的分离和鉴定。 实验原理：选择Gram染色的理由和选择血琼脂培养基的理由。 实