染色剂溶液的酸碱性.ppt

实验一 细胞器的光学显微镜观察 实验目的 1、观察人、植物活细胞内线粒体和液泡系的形态、数量与分布 2、学习一些细胞器的超活染色技术 实验原理 活体染色：能使生活有机体的细胞或组织特异性着色但对活样品又没有毒害作用的一种活体染色方法，其目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。活体染色技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。 超活染色：体外活体染色又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部分，主要是靠染料的“电化学”特性。碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带有阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们彼此之间就发生了吸引作用。但并非任何染料均可用于活体染色，理论上应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，且使用时需要配成稀淡的溶液。一般说来，最为适用的是碱性染料，这可能是因为它具有溶解在类脂质(如卵磷脂、胆固醇等)的特性，易于被细胞吸收。詹纳斯绿B(Janus green B)和中性红(neutral red)两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色分别具有专一性。 生物学实验中使用的染色剂分为酸性、碱性和中性，染色剂的酸碱性与化学上用H+的离子浓度来定义溶液的酸碱性不同，染色剂的酸碱性与染色剂的显色基团有关，由主要显色基团是阳离子或是阴离子来确定，若染色剂的主要显色基团是阳离子，为碱性染色剂；若染色剂的主要显色基团为阴离子，为酸性染色剂；若染色剂的显色基团既有阳离子也有阴离子则称为中性染色剂（又称复合染料）。有丝分裂实验用的醋酸洋红和龙胆紫溶液的显色基团均为阳离子，故都是碱性染色剂，亚甲基蓝、美蓝也是碱性染料；酸性品红、伊红是酸性染料，苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ弱酸性染料；对血液进行染色的赖特和吉姆萨是中性染色剂。 ??? 在细胞的组成中，原生质的碱性部分（如细胞质）容易与含阴离子的酸性染料发生亲合力而结合；而原生质的酸性部分（如染色质）容易与含阳离子的碱性染料发生亲合力而发生作用。而红细胞具有特殊的性质能与中性染色剂发生亲合力。由此可见细胞成分被染色的强弱与细胞成分的酸碱性以及染料的性质有关。 染色剂溶液的酸碱性 ??? 染色剂溶液的酸碱性是指染料溶液的pH值，例如醋酸洋红和龙胆紫溶液均为碱性染料，但它们的溶液却是酸性，而曙红为酸性染料但溶液是碱性，又如中性红是碱性染料而它的溶液呈中性。 ??? 染色剂溶液的酸碱性与试剂的成分、反应条件以及染料的溶解度等因素有关。如斐林试剂需要新配制的Cu(OH)2溶液，而双缩脲试剂需要碱性条件的Cu2+与蛋白质的肽键反应形成紫色或紫红色的络合物。又如洋红的等电点是pH4.07-4.5，此时洋红的溶解度最小，只有在高于或低于它的等电点的溶液中才易溶解，醋酸洋红的溶液呈酸性，但它的显色基团的化学性质没有改变，其中的醋酸分子穿透组织的速度快，并能够凝固核蛋白，更有利于对染色体的染色。同样用2%的醋酸配制的1%龙胆紫溶液呈酸性，它对根尖分生区细胞内染色剂的染色效果要好于1%龙胆紫水溶液。 ??? 由此可见染色剂的酸碱性不是指染色剂溶液的pH值，而是指染色剂对物质进行染色时与显色有关的主要基团是阳离子还是阴离子 线粒体是细胞内一种重要细胞器，是细胞进行呼吸作用的场所。细胞内氧化磷酸化和形成ATP的主要场所，细胞的各项活动所需要的能量，主要是通过线粒体呼吸作用来提供的。细胞中线粒体的具体数目取决于细胞的代谢水平，代谢活动越旺盛，线粒体越多。线粒体可占到细胞质体积的25%。一般真核细胞中含成百上千个线粒体，植物因有叶绿体的缘故，线粒体数目相对较少，单细胞鞭毛藻仅1个，酵母细胞具有一个大型分支的线粒体，巨大变形中达50万个；许多哺乳动物成熟的红细胞中无线粒体 。线粒体的形状多种多样, 一般呈线状,也有粒状或短线状。线粒体的直径一般在0.5～1.0 μm， 在长度上变化很大, 一般为1.5～3μm，长的可达10μm ，人的成纤维细胞的线粒体则更长，可达40μm，在胰脏外分泌细胞中可长达10~20μm，称巨线粒体 。不同组织在不同条件下有时会出现体积异常膨大的线粒体, 称为巨型线粒体(megamitochondria)。分布在细胞功能旺盛的区域。詹纳斯绿 B是线垃体的专一性活体染色剂。线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态(即有色状态)呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。 液泡是细胞内浓缩产物的主要场所，有十分重要的功能。液泡的功能主要是调节细胞渗透压，维持细胞内水分平衡，积累和贮存养料及多种代谢产物。液泡膜具有特殊的选择透性，使液泡具有高渗性质，