猪瘟病毒C株截短E2基因在大肠杆菌中表达及免疫原性初步检测.pdfVIP

• 12 • 生物技术 中国畜牧兽医 2014 年第 41 卷第 5 期 猪瘟病毒 C 株截短 E2 基因在大肠杆菌中 表达及免疫原性初步检测 郑伸华，李东升，姚俊唐，常艳，勾红潮，刘文俊，赵明秋，毛晶丹，陈金顶 (华南农业大学兽医学院，广东广州 510642) 摘要:本试验利用 PCR 技术，扩增得到猪瘟病毒(CSFV)C 株 E2 基因的主要抗原片段 A/D区 549 峙，将其酶切纯化后， 与己酶切纯化的 pET-32a 进行 16 C 过夜连接，转化大肠杆菌 BL2L 从转化成功的氨韦培养板挑取合适菌落进行 PCR，挑取 目的条带正确的菌落加至 LB 培养基进行过夜培养后送测序。将测序正确的菌液划板，挑菌培养并用 IPTG 进行诱导表达。 得到的蛋白进行 SDS，在约 39 ku 位置有蛋白条带。将蛋白纯化后，分别利用自制兔抗 CSFV 阳性血清及临床检测阳 性的猪抗 CSFV 阳性血清进行 Western blotting 检测，可见在 39 ku 处有单一条带，表明表达的蛋白具有免疫原性。本试验结 ELSIA 试剂盒的组装奠定基础，方便对猪场免疫猪群猪瘟抗体水平进行监控。 果为下一步 关键词:猪瘟病毒 C 株;A/D 主要抗原区;截短表达 中图分类号:Q786 文章编号:1671-7236(2014)05-0012-05 文献标识码:A 猪瘟(classical swine fever ,CSF) 是由猪瘟病毒 A/D 区中 690-766 aa区域是一段高抗原性的表位 (classical swine fever virus , CSFV) 引起猪的一种 集中区，但并没有阐明其中的核心区域(刘两等， 2008L E2 蛋白主要抗原表位的 6 个半脱氨酸中在 急性或慢性、热性和高度接触性传染病。近几十年 693-737 及 792-856 aa 之间各形成 1 对二硫键， 来，不少国家先后采取了消灭 CSF 的措施，如欧盟 这 2 对二硫键确定了 E2 蛋白基本构象，也确定了 2 国家采取扑杀带毒猪、制定兽医法规、消毒环境等措 个相对独立的抗原结构单位。在 818-828 位还有 施，取得显著效果(Tarradas 等， 2011 )。但目前本 1 对二硫键，使得蛋白分子表面稍微向内凹陷，形成 病在中国仍时有发生，是对养猪业危害最大、最危险 1 个沟状结构(苏小运，2003) 。 的传染病之一(陈搏言，1980) 。由于普遍进行疫苗 本研究选择包括 E2 蛋白 A/D 区的主要抗原 接种等预防措施，大多集约化猪群己具有一定的免 区和以上 3 对二硫键的区域进行原核表达，既保证 疫力，使近年 CSF 流行形式发生了变化，出现非典 了蛋白良好的抗原性，又保证了其完整构象。 PCR 型 CSF、温和型 CSF，呈散发性流行。发病特点为 扩增后连接至 pET-32a 载体，将重组质粒转化于大 临诊症状轻或不明显，死亡率低，病理变化不明显， 肠杆菌 BL21 后，经诱导获得重组蛋白并进行了 必须依赖实验室的诊断才能确诊(张艳英等，2013) 。