16 杂交技术.pptVIP

核 酸 杂 交 目的与要求 了解核酸探针的概念、种类及选择原则 了解核酸探针的标记和检测方法 了解常用核酸杂交的方法及应用 核酸分子杂交 核酸分子杂交的基础：分子单链之间的互补碱基通过非共价键（主要是氢键）的形成即出现稳定的双链区。 杂交分子的形成并不要求两条单链的碱基顺序完全互补。 分子杂交可在DNA与DNA、RNA与RNA或RNA与DNA的二条单链之间进行。 DNA与DNA杂交：一般DNA以双链存在，在进行杂交时，先将其解聚成为单链（变性）。再退火使单链聚合成双链。 定性或定量分析分子杂交：将一种核酸单链用同位素或非同位素标记成为探针，再与另一种核酸单链进行分子杂交。 核酸分子杂交的发展 液相杂交：Hall等1961年将探针与靶序列在溶液中杂交，通过平衡密度梯度离心分离杂交体。该法很慢、费力且不精确，但它开拓了核酸杂交技术的研究。 固相杂交： Bolton等1962年设计了第一种简单的固相杂交方法，称为DNA-琼脂技术。 膜杂交：60年代中期Nygaard 等的研究为应用标记DNA或RNA探针检测固定在硝酸纤维素（NC）膜上的DNA序列奠定了基础。Brown等应用这一技术评估了爪蟾rRNA基因的拷贝数。 原位杂交：Orth（1970）应用3H标记的兔乳头状瘤病毒cRNA探针与兔乳头状瘤组织的冰冻切片进行杂交，首次用原位杂交检测了病毒DNA在细胞中的定位。 核酸分子杂交的技