第十章_基因工程导论.pptVIP

C 基因工程的理论基础 A 基本定义 B 基因工程的基本形式 C 重组DNA技术的理论基础 A 用于核酸操作的工具酶 C 用于基因转移的受体菌或细胞 A DNA的体外重组（切与接） B 重组DNA分子的转化和扩增（转与增） C 转化子的筛选和鉴定（检） 核酸分子杂交 Southern杂交－检测DNA A 鸟枪法 B cDNA法 E 基因文库的构建 cDNA第二链的合成 煮沸 NaOH 自身引导法：获得的双链cDNA 5’端会有几对碱基缺失 AAAAAAAAAAAAAA 5‘ppp’5 G G AAAAAAAAAAAAAAOH 3’ TTTTTTTTTTTTTTp 5’ TTTTTTTTTTTTTTp 5’ TTTTTTTTTTTTTTp 5’ AAAAAAAAAAAAAAOH 3’ TTTTTTTTTTTTTT OH 3’ Klenow dNTPs S1 cDNA第二链的合成 DNApol dNTPs RNaesH 置换合成法：获得的双链cDNA 5’端也会有几对碱基缺失 5‘ppp’5 G G AAAAAAAAAAAAAAOH 3’ TTTTTTTTTTTTTTp 5’ AAAAAAAAAAAAAAp 5’ 5’ S1 AAAATTTOH 3’ TTTTTTTTTTTTTTp 5’ 5’ TTTTTTTT