大鼠海马神经元原代培养.pptxVIP

大鼠海马神经元原代培养 汇报人：何克宇 实验要点 取活体细胞 令海马神经元贴壁生长 神经元培养液 实验材料 动物：大鼠胎鼠（15~20天） 试剂：多聚赖氨酸 解剖液（DMEM+PBS） 0.125%胰蛋白酶 培养液：①DMEM+F12+10%胎牛血清 ②Neurobasal+2%b27+1%双抗 1.器械灭菌 2.多聚赖氨酸（PLL）铺板 0.1mg/ml，包被30min，吸去多余PLL， 过夜晾干 实验步骤 实验步骤 1.孕鼠颈椎脱臼处死，取胎鼠 2.胎鼠断头，置于PBS，取全脑，置于解剖液（冷） 3.体视显微镜下沿中线分离半球，取海马，仔细分离血 管和膜性组织。（快、干净） 实验步骤 实验步骤 胰蛋白酶（预暖）消化15min，3~5min震荡一次。 静置2min，去上清，PBS洗两遍终止消化 加入DMEM，吹打，取上清。重复3次。 种板，培养液（DMEM+F12+10%胎牛血清），细胞密度3.5*105/cm2 6h，换培养液（Neurobasal+2%b27+1%双抗） Thank You