16荧光红外酶标仪.ppt

§16.1 光学仪器简介 一、光学知识回顾 二、光分析法及其特点 光分析法：基于电磁辐射能量与待测物质相互作用后所产生的辐射信号与物质组成及结构关系所建立起来的分析方法； 电磁辐射范围：射线～无线电波所有范围； 相互作用方式：发射、吸收、反射、折射、散射、干涉、衍射等； 光分析法在研究物质组成、结构表征、表面分析等方面具有其他方法不可取代的地位； 三个基本过程： （1）能源提供能量； （2）能量与被测物之间的相互作用； （3）产生信号。 基本特点： （1）所有光分析法均包含三个基本过程； （2）选择性测量，不涉及混合物分离（不同于色谱分析）； （3）涉及大量光学元器件。 三、电磁辐射的基本性质 三)、本章仪器所用的光波 四、光分析法仪器的基本流程 §16.2 酶标仪的原理应用及操作 2、酶标仪能干什么？ 酶标仪广泛地应用在临床检验、生物学研究、农业科学、食品和环境科学中 酶联免疫检测试剂盒 RCH（IgG和IgM）检查通常也称为优生优育十项检查 ；T3、T4、TSH、TORCH系列、不孕系列、各种癌症标志物、伤寒、副伤寒 ；另外通过母婴传播的性传播疾病（如淋病、梅毒、HIV）和肝炎（如HBV、HCV），以及胎儿的抗体，新生儿TSH的测定，疫苗反应等。 常用的三种检测方法 （二）间接法 其原理为利用酶标记的抗体来检测已与固相抗原结合的受检抗体。操作步骤如下： （1）特异体抗原－固相载体联结－ 固相抗原－洗涤除去杂质。 （2）稀释的受检血清中的特异性抗体－固相抗原结合，形成固相抗原抗体复合物。洗涤后固相载体上只留下特异性抗体。 （3）酶标抗免疫球蛋白（酶标抗体），与固相复合物中的抗体结合，该抗体间接地标记上酶。清洗后，固相载体上的酶量就代表特异性抗体的量。 （4）加底物显色，颜色深度代表标本中受检抗体量。 （三）竞争法 竞争法可用于测定抗原，也可用于测定抗体。以测定抗原为例，受检抗原和酶标抗原竞争与固相抗体结合，因此，结合于固相的酶标抗原量与受检抗原的量成正比。 酶标仪和普通光电比色计的不同 一、盛装比色液的容器不是使用比色皿，而是塑料微孔板。塑料微孔板常用透明的聚乙烯材料制作，它对抗原或抗体有较强的吸附； 二、酶标仪的光束是垂直通过待测液的； 三、酶标仪通常不使用A而是使用光密度OD来表示吸光度。 5、酶标仪操作注意事项 1、使用加液器加液，加液头不能混用。 2、洗板要干净。最好使用洗板机洗板，避免交叉污染。 3、严格按照试剂盒的说明书操作，反应时间准确。 4、测量时勿碰酶标板，以防挤伤。 5、勿将样品或试剂洒到仪器表面或内部，操作完毕后要洗手。 6、具有污染性、毒性和生物学危害的样品或试剂，严格按照操作说明，以防对操作人员造成损害。用后并及时清洗和消毒。 7、不得在测量过程中关闭电源。 8、使用后盖好防尘罩。 9、切勿擅自拆卸酶标仪。 分子的活化与去活化 荧光分光光度计的类型 历程：手控式荧光分光光度计、自动记录式荧光分光光度计和计算机控制式荧光分光光度计。 类型：单光束、双光束荧光分光光度计、低温激光Shpol’skill荧光分光光度计 、配有寿命和相分辩测定的荧光分光光度计等。 主要产品： 天津港东生产的F-380型、F-320型、F-280型； 　　天津拓普生产的WFY-28型荧光分光光度计； 上海精密生产的970CRT型荧光分光光度计； 上海棱光生产的F96型荧光分光光度计 等 仪器光路图 3.生物化学及生理医学方面的应用 因荧光法有很高的灵敏度和较好的特效性，在生物化学及生理医学方面有重要应用。 例：用荧光法研究氨基酸和蛋白质。虽然游离氨基酸中能产生荧光的只有几个带苯环的氨基酸如色氨酸、酪氨酸和苯基丙氨酸，然而，某些蛋白质含有荧光辅酶(Fluorescent coenzyme)，荧光辅酶生色剂可用于许多蛋白质的荧分析中。 例：镇静剂利血平具有荧光，它还可氧化成具有更强烈荧光的产物再进行分析。 紫外-可见分光光度计测量池(吸收池) §16.3 红外光谱仪原理应用及操作简介 二）、非色散型红外吸收光谱仪 制得的晶片须无裂痕，局部无发白现象，如同玻璃般完全透明，否则须重新制作。 晶片局部发白，表示压制的晶片厚薄不匀；晶片模糊，表示晶片吸潮，水在光谱图3450cm-1和1640cm-1处有吸收峰。 近红外光谱分析的应用 漫反射测量固体和粉末样品：部分光线直接经镜面反射离开外，有部分在样品内经反复的反射、吸收、衍射等过程重新从表面逸出，形成漫反射光。漫反射光包含样品物质结构、形态等信息。无损检测、快速、样品制备简单。球积分仪或特定的漫反射载样装置。 使用化学计量学、数学方法建立模型。 应用：食