表达海肾荧光素酶的重组柯萨奇病毒.pdf

国际病毒学杂志 2015年 6月第 22卷第3期 InternationalJournalofVirolo~．June2015．Vo1．22．No．3 · 149 表达海 肾荧光素酶的重组柯萨奇病毒 B组 3型质粒的构建及鉴定 王慧 武帅钦 陈阳 钟照华 赵文然 佟雷 【摘要】 目的 构建能表达荧光素酶的重组柯萨奇病毒B组3型(coxsaekievirusB3，CVB3)，以 实现定量检测CVB3。方法 将荧光素酶基因克隆至CVB3基因组开放读码框起始位置，重组病毒基 因组 DNA转染HeLa细胞以恢复病毒、测序，评价重组病毒的荧光素酶表达，扩增重组病毒并测定重 组病毒株毒力。结果 成功构建2个重组病毒质粒，转染 HeLa细胞 ，表达海肾荧光素酶(humanized formofRenillaLuc，hRLuc)、荧火虫荧光素酶 (fireflyluei~rase，Luc)的pCVB3一hRLuc和 pCVB3一Luc 转染后第 1代均可检测到hRLuc和Luc活性，但只有pCVB3一hRLuc转染细胞有明显细胞病变。扩增 和纯化的CVB3．hRLuc病毒感染HeLa细胞可见明显细胞病变及hRLuc活性。扩增的CVB3一Lnc没有 观察到明显的细胞病变，且从第2代病毒开始就未能检测到荧光素酶活性。用HeLa细胞经空斑形成 试验进行毒力测定，CVB3一hRLuc的毒力为 1．4(10pfu／m1)。结论 成功构建了表达 hRLue的重组 CVB3毒株CVB3一hRLuc，为定量研究CVB3感染打下基础。 【关键词】 柯萨奇病毒B组3型；海肾荧光素酶；基因重组 Constructionsand identification ofrecombinantCoxsackievirusB3withRenillaluciferaseexpression WANGHui，WU Shuai—qin，CHEN Yang,ZHONGZhao—hua，ZHA0 Wen—ran，TONGLeL Theexperimental teachingcenter0厂etiology,HarbinMedicalUniversity,Harbin150081，China；Themicrobiologysection， HarbinMedicalUniversi@；Thecellbiologysection，HarbinMedicalUnive~ity． Correspondingauthor：TONGLei，Email：leitongO07@ 163．com A【bstract】Objective TodeveloprecombinanteoxsackievirusB3(CVB3)withhumanizedfomr oflu— ciferaseexpressionofrquantitativeanalysisofCVB3infection．Methods Theluciferasegenewasclonedat thebeginningoftheopenreadingframeofCVB3genome．TherecombinantviruseswererecoveredbyHeLa celltransfection．Thesequencesoftheserecombinantswereconfimr ed．Theexpression ofhRLucandvim— Iencehadbeenevaluated．Results TworecombinantplasmidscontainedmodifiedCVB3genomeweresue— eessfullyconstructed．hRLucorLuccouldbedetectedintheHeLaceilstransfectedwithpCVB3一hRLucand pCVB3一LuebytransfectingHeLacells，however，cytopathieeffect(CPE)couldonlybeobservedinHeLa cellstransfectedwith pCVB3一hRLuc．Thenewly consturctedCVB3一hRImC viurseshad been clonedbv plaquefomr ingassay．InfectedwiththeclonedCVB3一hRLucviruses，hRLuccouldbedetectedconsistently． However，CVB3一Lucfailed to show theluciferaseexpre