直接计数法.ppt

直接計數法 血球計數器 中格 (E) 計算 Volume (體積) =長 x 寬 x 深度 = 0.2 mm x 0.2 mm x 0.1 mm = 0.004 mm3 = 4 x 10-6 cm3 (mL) 若該體積有n個細胞，則細胞濃度為 = n個 / (4 x 10-6 mL) = n x 2.5 x 105 個/mL (若有稀釋需再乘上稀釋倍率) 小格(F)計算 Volume (體積) =長 x 寬 x 深度 = 0.05 mm x 0.05 mm x 0.1 mm = 0.00025 mm3 = 2.5 x 10-7 cm3 (mL) 若該體積有n個細胞，則細胞濃度為 = n個 / (2.5 x 10-7 mL) = n x 4 x 106 個/mL (若有稀釋需再乘上稀釋倍率) 原則上，只要了解所計算之格子大小，算得菌數後，皆可以求得每mL之菌數。 有三種不同大小之計算法，純粹是因應觀測微生物本身之大小，例如酵母菌體型較大，可以大格及中格計算；而一般細菌則較適合中格及小格。 計算時至少要取三個以上、不同位置之格子做計算，求其 平均值 + 標準偏差。此可由工程計算機內統計輸入求得，請自行熟悉計算機之操作。 實驗大致步驟 取1克酵母菌粉加入100mL之培養液中，混合均勻； 將菌液進行10倍稀釋至10-3，將不同濃度之菌液在595nm波長，以分光光度計測其吸收值(通常由低濃度往高濃度測，如此管子不必換)； 由各不同濃度取1滴菌液，置於血球計數器上，蓋上蓋玻片； 以顯微鏡觀察，調整至最佳視野(即可見觀測微生物時) ，計算格子內菌數值(要知道大、中、小格之體積大小) ，隨機選擇5格測量，取其平均值。注意 : 如果此時菌數太多，則要將菌液進一步稀釋，爾後計算再將稀釋倍數調回。 推算每mL所含菌數，取log值，並與所測吸光值作圖(至少有3點數據)； 理論上將可得一直線。 保留此數值，在生長曲線實驗時可以用。如已作過生長曲線實驗之組，應以當時所得直線方程式結果，將此次之吸光值，代入，求菌數，比較兩者之結果。 * Hemocytometer (血球計數器)介紹 /~bioslabs/methods/microscopy/cellcounting.html 由此滴加樣本 細胞濃度計算 大格計算 Volume (體積) =長 x 寬 x 深度 = 1 mm x 1 mm x 0.1 mm = 0.1 mm3 = 1 x 10-4 cm3 (mL) 若該體積有n個細胞，則細胞濃度為 = n個 / (1 x 10-4 mL) = n x 104 個/mL (若有稀釋需再乘上稀釋倍率) 常使用計數ABCD四區域有n個細胞，則細胞濃度為 = n / 4 x 104 （個/mL） 細胞計數時，細胞濃度不要太稀，太稀準確度會比較低，最好在100～300 x 104 個/mL 1 mm 1 mm Hemocytometer (血球計數器) A B C D E(中格) ，下頁 F小格 E (中格) 0.2 mm 0.05 mm *