淘汰血红蛋白血液硫酸铜比重试验.docVIP

淘汰血红蛋白血液硫酸铜比重试验、沙利氏目测法的原因及替代方法 　　血红蛋白(Hb)是红细胞的主要成份，具有与氧分子呈可逆性结合的功能，是人体内氧的运输和交换的主要载体。许多疾病的病理生理变化都涉及Hb质或量的改变。因此，选择一种简便、快速、准确的Hb测定法，对于贫血及其他造血系统疾病的诊断和治疗有着重要的意义。 　　自1875年Gower设计稀释溶血液目视比色法以来，血液学工作者对Hb测定进行的大量探讨，大致可分为四大类，即：（1）根据血液物理特性测Hb(比重法)：(2)根据Hb分子组成而设计的总Hb测定法(全血铁法)；(3)根据Hb有O2可逆性结合的特性测Hb(血气分析法)，和(4)根据Hb衍生物光谱特点进行的定量法。其中有些方法虽简单易行，但误差较大，随着技术的进步和研究的深入，逐渐被淘汰。惟其如此，此次卫生部令决定在国内淘汰硫酸铜比重血红蛋白测定法和沙利氏(Sahli)比色Hb测定法，并推荐氰化高铁法做为可替代的方法。 淘　汰　的　理　由 一、为什么淘汰血红蛋白硫酸铜比重测定法 　　硫酸铜比重法测量血红蛋白的实验原理是根据血液血红蛋白与比重的关系，将血液滴入己知比重的标准硫酸铜溶液内，观察血滴悬浮的情况，求出血红蛋白含量的近似值。不难看出，此法相当粗糙，很难得出精确的结果。其干扰因素很多，有自然因素，也有人为因素。例如：(1)硫酸铜含5个结晶水，易于风化和潮解，不易准确配成各种比重的溶液。(2)多次加入血液后，硫酸铜溶液的比重有所改变，影响沉淀的准确度。(3)滴入的血样包括血浆和有形成份(血细胞)两部分，血浆成份(如血脂、血浆蛋白)质和量的改变或血细胞病理性变化(红细胞的大小及其内在的Hb含量)均与比重有关。因此，单从全血比重角度推测Hb含量，有时会带来偏差。(4)需要严格掌握实验条件。不但要注意溶液配制时的温度，试验时标本与硫酸铜溶液温度也必须十分接近。有报告指出，在室温(22)的硫酸铜溶液不宜与刚从人体采出的血液(37)试验，这点在冬季尤为重要。另外，实验时也需严格的操作步骤(如加血样手法、高度、观察血滴动态变化情况)，这些条件直接影响实验的准确程度。由于这些不足，卫生部令废除此项实验。 二、为什么淘汰血红蛋白沙利氏比色测定法 　　1895年沙利氏刨用了酸化血红素法进行Hb的比色测定，在全世界应甩昂近百年，长期以来此法在临床检验中(特别是在基层医疗单位)起了很大作用。但随着技术的进步和研究工作的深入，其缺点亦日渐突出，现已不能满足日益发展的临床医学的需要。其主要缺点为：(1)不能转化生理或病理血液中全部的Hb，对碳氧血红蛋白，还原型血红蛋白转化很慢或转化不完全。(2)由于目视比色，个体观察的主观差异较大。(3)血红蛋白转化时间较长，5分钟转化88％，10分钟95％，2小时才基本转化完毕。(4)纶戋反应不明显，在接近或到达终点时，加入稀释液后颜色变化不明显。比色过程不易标准化，往往由于比色板颜色不一致而影响测定结果。(5)色板与转化液色调不一致，往往给实验带来误差。由于这些因素，此次部长令决定淘汰沙利氏Hb测定法。 替　代　方　法 一、氰化高铁血红蛋白(HiCN)测定法及其质量控制 　　为统一Hb测定方法，1966年国际血液学标准化委员会(1CSH)推荐氰化高铁血红蛋测定法(下称HiCN)作为国际Hb测定标准方法。1978年ICSH，国际临床化学联合会(1FCC)和世界病理学会联合会(WASP)发表的国际性文件中重申了HiCN法。1983年中华医学会临床检验分会桂林会议以来，HiCN法逐渐在国内普及，对Hb测定的标准化起了重要作用。下面着重介绍HiCN法及其有关问题。 （一）HiCN法的优点 　　HiCN法之所以被选为国际标准方法，是因其具备以下几个重要特点：(1)操作简单，稀释液(试剂)为单一试剂。(2)除SHb外，其余Hb衍生物均可很快地转为HiCN。(3)HiCN在540nm处吸收峰较宽，可用一般分光光度计或滤光板比色计进行测定。(4)显色快而稳定，因此HiCN液可制成在相当长时间(至少六年)内稳定性不变的标准液，这对进行质量控制工作极为有利。(5)可以通过分光光度法测定直接定值。 （二）实验原理 　　血红蛋白被高铁氰化钾氧化成高铁血红蛋白(Hi)，后者与氰基结合成稳定的棕色氰化高铁血红蛋白(HiCN)。在规定的波长和液层厚度的条件下具有一定的吸光系数。因此，根据其吸光度，即可求得Hb浓度。其化学反应式为 　　Hb＋K3[Fe(CN)6]→Hi 　　Hi＋CN-→HiCN (三)试剂 　　经典的HiCN法有二种常用试剂(又称为转化液)，其配方为： 　　Drabkin(都氏)液：称取K3[Fe(CN)6)200mg，KCN 50mg和NaHCO31g，加蒸馏水至1000ml。 　　Van Kampen—Zi