冷冻电镜三维重构.PDFVIP

冷冻电镜三维重构 2004.6 冷 冻 电 镜 三 维 重 构 北京大学医学部生物物理系 王佩荣 摘要：冷冻电子显微学从创立到现在已发展成为确定蛋白质分子，蛋白质复合物和细胞器结构的一种有效、 的方法这表现在三位冷冻电镜技术的不同方面。这主要包括适合于显微镜真空环境的样品制备条件，减少 辐射损伤的策略，提高未经染色的电子显微像的信躁比的方法和二位投影三位重构的不同方法。冷冻电镜 通过高压快速液氮冷冻的制样方法能够使样品处在接近于生理环境的玻璃态冰中从而保持其天然构像，并 且由于快速冷冻可以捕捉到某个反应过程的中间状态从而可以对大分子复合物进行生物学功能的动态研 究。确定三维结构的方法主要有电子晶体学方法、单粒子重构法和电子断层成像技术。在主要的测定结构 的方法种，冷冻电镜是唯一的能研究小到小的蛋白质，蛋白质复合物大到细胞器甚至整个细胞的方法。 关键词：冷冻电镜；三维重构；单粒子法；断层成像；电子晶体学 引言 在大量的基因序列被阐明后人们发现这还远远不能解释复杂的生命活动，必须对功能 活动的执行者基因的表达产物蛋白质进行结构和功能上