人类细胞质、RT-PCR的原理、方法、琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用.pptVIP

RNA电泳结果 rRNA可以作为内部Marker分子，通过观察rRNA的两条带（28S和18S）的比例，可以判断所提取mRNA是否存在降解。 RNA电泳并不能判断mRNA是否提取成功，也不作为鉴定RNA提取质量的常规方法，因为在电泳过程中RNA可能发生降解。 RT-PCR RT-PCR：逆转录PCR，或者称反转录PCR(reverse transcription-PCR, RT-PCR)，是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的变形。是一快速、简便、敏感性极高的检测RNA的方法。 RT-PCR的原理 提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增，而获得目的基因或检测基因表达。 RT-PCR的应用 分析基因的转录产物 获取目的基因 合成cDNA探针 构建RNA高效转录系统 * RT-PCR的步骤 提取原理 、方法 逆转录酶、引物 提 取 总RNA 合成cDNA 原理体系 引物选择 PCR 电泳原理 电泳步骤 电 泳 提 取 总RNA 合成cDNA PCR 电 泳 逆转录酶： 存在于逆转录病毒体内。 常见有哺乳动物型37oC，禽类型42oC 。 以mRNA为模板的DNA聚合酶，形成与