第10章生物素-亲合素放大技术.pptVIP

思考题 生物素的分子结构特点是什么？ 生物素通过什么结构、形式与生物大分子相连结？ 亲合素或链霉亲合素的分子结构、理化性质有何特点？ 为什么亲合素、链霉亲合素具有“桥联”作用？ 亲合素、链霉亲合素可以被哪些示踪剂标记？ 为什么生物素－亲合素系统具有放大作用？ 生物素与亲合素或链霉亲合素的结合是否与抗原抗体结合相同？ 生物素－亲合素系统放大的是反应过程还是单一检测信号的能量？ 生物素、亲合素或链霉亲合素如何与标记免疫技术联接？ 如何将生物素－链霉亲合素放大系统用于所有双位点ELISA? 小 结 生物素—亲合素（链霉亲合素）系统具有的多级放大独特效应，可极大地提高分析测定的灵敏度；二者之间的高亲和、高特异结合以及既可偶联生物大分子，又可连接标记材料的特性，使该系统在标记免疫分析技术领域中的应用具有很强的稳定性和适用性。该系统有二种基本类型：以游离亲合素为中间物，分别连接包含生物素化大分子的待检反应体系和标记生物素的BAB法或ABC技术；另一类是直接用标记亲合素连接生物素化大分子反应体系进行检测的BA法或LAB。 在生物素—亲合素（链霉亲合素）放大系统应用中，无论采用酶、荧光素或发光物作为检测示踪剂，均是待测抗原与生物素化抗体反应形成复合物后，再利用生物素与亲合素间的多价放大结合特性，或直接与标有示踪剂的生物素结合（BA、LAB法），或依次与亲合素（链霉亲合素）、生物素示踪标记物反应连接成聚合物（BAB、ABC法），最终使待测反应信号被放大，提高检测方法的灵敏度。 第十章 生物素-亲合素放大技术 第一节 生物素-亲和素系统 生物素-亲和素系统具有特异、敏感、稳定、 灵活等多种优势，这些特性与其理化性质密切相关。 维生素H 动、植物组织中广泛 分布,卵黄和肝含量高 分子量 244.31kD. I环为咪唑酮环，可与亲合 素结合 Ⅱ环为噻吩环，C2上戊酸 侧链的未端羧基是结合生 物大分子的唯一结构 I 咪唑酮环 Ⅱ 噻吩环 羧基 一、生物素 选择题 生物素分子中与亲和素结合的重要部位是（ ） A.咪唑酮环 B.苯环 C.吩噻环 D.羰基 E.-NH- A 二、活化生物素 生物素侧链的末 端羧基经化学修 饰后制成带各种 活性基团的衍生 物－活化生物素 (生物素化衍生物) 生物素活化 活化生物素易 与抗原、抗体、 酶及核酸分子 中相应基团偶 联形成生物素 化标记物 标记蛋白质氨基的活化生物素 标记蛋白质醛基的活化生物素 标记蛋白质巯基的活化生物素 标记核酸的活化生物素 用活性生物素标记的物质，下列哪项除外（ ） A.蛋白质的氨基 B.蛋白质的羧基 C.蛋白质的巯基 D.蛋白质的醛基 E.核酸 选择题 B 活化生物素 标记蛋白质氨基的活化生物素 BNHS分子可与蛋白质赖氨酸的氨基形成肽键 BNHS适用标记抗体和中性或偏碱性的蛋白质 生物素 N-羟基丁二酰胺 碳二亚胺 生物素羟 基琥珀酰 亚胺酯（ BNHS ） 活化长臂生物素 (BCNHS) 是在生物素和 N-羟基丁二酰亚胺之间添加了两个 6- 氨基己糖分子基团，形成连结臂， 使其与抗体、酶等生物大分子结合后，不受位阻效应的影响, 更易发挥生物素的活性作用 标记蛋白质醛基的活化生物素 生物素酰肼(BHZ)：水合肼与生物素的合成物 主要用于标记偏酸性糖蛋白(Ag) 肼化生物胞素(BCHZ) ：生物素与赖氨酸连接 后，再与无水肼反应而成。除醛基外， BCHZ还可标记氨基 标记蛋白质巯基的活化生物素 马来酰亚胺-丙酰-生物胞素（MPB) 能特异地与蛋白质巯基结合的活化 生物素 标记核酸的活化生物素 光敏生物素(photobiotin) 侧链上连接的芳香基叠氮物基团, 经光照后, 变为芳香基硝基苯，可直接与腺嘌呤氨基结合, 形成B（生物素）-核酸探针 二、亲合素和链霉亲合素 　　　亲合素(avidin, A) 和链霉亲合素(streptavidin, SA)是生物素的天然特异性结合物。而且，二者均为大分子蛋白，因此几乎所有用于标记的物质均可以同亲合素或链酶亲合素结合。 亲合素又称抗生物素蛋白，分子量为68kD，pI 10；在pH9～13缓冲液中性质均稳定，耐热并耐多种蛋白水解酶的作用。天然亲合素由4个相同的亚单位构成4聚体；每个亲合素亚单位通过其结构中的色氨酸残基与生物素中的I环结合。 通常，亲合素的活性单位是以亲合素结合生物素的量来表示的，即以能结合1ug生物素所需要的亲合素量为1个亲合素活性单位。一般1mg亲合素约含13～15个活性单位。 亲合素 亲和素（