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检测鸭坦布苏病毒NS1抗体ELISA方法的建立.pdf

检测鸭坦布苏病毒NSl抗体ELISA方法的建立 孙敏华·,郭建伟。2,李林林1,董嘉文·,邝瑞欢·,吴玄光z,张建峰·,胡奇林肆,张春红H (1.广东省农业科学院动物卫生研究所,广东省畜禽疫病防治研究重点实验室,广东省兽医公共卫 生公共实验室,广东 广州 510640;2.华南农业大学兽医学院,广东广州 510642; 3.福建农业科学院畜牧兽医研究所,福建。福州 350013) 摘要:为了检测鸭群中鸭坦布苏病毒的血清学流行情况,本研究在前期成功表达鸭坦布苏病毒NSI蛋白 的基础上,建立了检测鸭血清中鸭坦布苏病毒抗体的间接ELISA方法。棋盘法确定了当纯化的NSI蛋白包被量 为0.188ug/孔,待检血清l:200稀释,HRP标记的兔抗鸭二抗1:16000倍稀释时反应条件最佳。在最佳反应 条件下,阴阳性临界值判定标准为0.467.用建立的间接ELISA方法对番鸭细小病毒、鹅细小病毒、鸭肝炎病 毒、鸭疫里默氏杆菌阳性血清进行了检测,均无交叉反应,表明该方法具有良好的特异性。批内和批间重复试验 的最大变异系数分别为6%和1 ojI,显示该方法具有很好的稳定性。用建立的ELISA方法检测临床鸭坦布苏病毒 感染鸭及政毒蛋鸭的55份临床血清样品,测得52份为阳性,阳性率为94.5%,对36份阴性鸭群血清样品进行 检测,36份为阴性,阴性率为100jl。该方法为鸭坦布苏病毒的诊断和ifS-病学监测奠定了基础。 关键词:鸭坦布苏病毒:NSI蛋白;ELISA 中图分类号:S858.32;Q349+.55文献标识码:A EstablishmentofanELISAforthe ofNS1Proteinof Assay Detection DuckTembusuVirus Sun Minhual,Guo Jianweil‘LiLinlinl,DongJiawenl,KuangRuihuanl, Wu Xuanguan92,ZhangJianfen91,HuQilinr,Zhangchunhon91‘ ofPublic ofAnimal (GuangdongOpenLaboratoryHealth,Institute ofAgriculturalSciences, Health,GuangdongAcademy 5 China 5 Guangzhou10640,China;2.CollegeofVeterinaryMedicine,SouthAgriculturalUniversity,Guangzhou10642,China;3. InstituteofAnimal and HusbandryVeterinaryMedicine,F嘶ianAcademyofAgriculturalSciences,Fuzhou350013,China) survillancethe ofDuck Vinls in Abllllllct,.To Tembusuantibodicsduck serologicalprevalence flocks,an indirect LinkedImmunosorbcntestablishedbasedOlltherecombinantNSl ELISA(E

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