检测鸭坦布苏病毒NS1抗体ELISA方法的建立.pdfVIP

检测鸭坦布苏病毒NSl抗体ELISA方法的建立 孙敏华·，郭建伟。2，李林林1，董嘉文·，邝瑞欢·，吴玄光z，张建峰·，胡奇林肆，张春红H (1．广东省农业科学院动物卫生研究所，广东省畜禽疫病防治研究重点实验室，广东省兽医公共卫 生公共实验室，广东 广州 510640；2．华南农业大学兽医学院，广东广州 510642； 3．福建农业科学院畜牧兽医研究所，福建。福州 350013) 摘要：为了检测鸭群中鸭坦布苏病毒的血清学流行情况，本研究在前期成功表达鸭坦布苏病毒NSI蛋白 的基础上，建立了检测鸭血清中鸭坦布苏病毒抗体的间接ELISA方法。棋盘法确定了当纯化的NSI蛋白包被量 为0．188ug／孔，待检血清l：200稀释，HRP标记的兔抗鸭二抗1：16000倍稀释时反应条件最佳。在最佳反应 条件下，阴阳性临界值判定标准为0．467．用建立的间接ELISA方法对番鸭细小病毒、鹅细小病毒、鸭肝炎病 毒、鸭疫里默氏杆菌阳性血清进行了检测，均无交叉反应，表明该方法具有良好的特异性。批内和批间重复试验 的最大变异系数分别为6％和1 ojI，显示该方法具有很好的稳定性。用建立的ELISA方法检测临床鸭坦布苏病毒 感染鸭及政毒蛋鸭的55份临床血清样品，测得52份为阳性，阳性率为94．5％，对36份阴性鸭群血清样品进行 检测，36份为阴性，阴性率为100jl。该方法为鸭坦布苏病毒的诊断和ifS-病学监测奠定了基础。 关键词：鸭坦布苏病毒：NSI蛋白；ELISA 中图分类号：S858．32；Q349+．55文献标识码：A EstablishmentofanELISAforthe ofNS1Proteinof Assay Detection DuckTembusuVirus Sun Minhual，Guo Jianweil‘LiLinlinl，DongJiawenl，KuangRuihuanl， Wu Xuanguan92,ZhangJianfen91，HuQilinr，Zhangchunhon91‘ ofPublic ofAnimal (GuangdongOpenLaboratoryHealth，Institute ofAgriculturalSciences， Health，GuangdongAcademy 5 China 5 Guangzhou10640，China；2．CollegeofVeterinaryMedicine，SouthAgriculturalUniversity,Guangzhou10642，China；3． InstituteofAnimal and HusbandryVeterinaryMedicine，F嘶ianAcademyofAgriculturalSciences，Fuzhou350013，China) survillancethe ofDuck Vinls in Abllllllct,．To Tembusuantibodicsduck serologicalprevalence flocks，an indirect LinkedImmunosorbcntestablishedbasedOlltherecombinantNSl ELISA(E