吸光光度分析法.pptVIP

第12 章 吸光光度法 12—1 基本原理 一、概述 二、光吸收的基本原理 三、光吸收基本定律 一、概述 二、光吸收的基本原理 2、物质对光的选择性吸收 吸收曲线的讨论： 三、光吸收基本定律 透光度(透光率)T 朗伯—比耳定律的意义 2.摩尔吸收系数ε的讨论 3.定量分析方法——标准曲线法 标准曲线法的应用 3.偏离朗伯—比耳定律的原因 （1）物理性因素 （2） 化学性因素 12—2 分光光度计 一、基本组成 二、分光光度计的类型 一、基本组成 1. 光源 2.分光系统 3. 样品室 4. 检测系统 12—3 显色反应及其影响因素 一、显色反应 二、显色反应条件的选择 三、共存离子干扰的消除 一、显色反应 3.显色反应的分类： 5.显色剂的选择 显色剂的种类： 二、显色反应条件的选择 三、共存离子干扰的消除 12—4 测量条件的选择 一. 入射光波长的选择 二. 参比溶液的选择 三. 读数范围的选择 四、提高光度测定灵敏度和选择性的途径 12—5 分光光度法的应用 一、普通分光光度法 二、示差分光光度法 三、应用 一、普通分光光度法 二、示差分光光度法（示差法） 三、应用 例： 铬酸盐或重铬酸盐溶液中存在下列平衡： CrＯ42- ＋2H＋ = Cr2Ｏ72- ＋H2Ｏ 溶液中CrＯ42-、 Cr2Ｏ72-的颜色不同，吸光性质也不相同。故：此时溶液pH 对测定有重要影响。 故：朗伯—比耳定律只适用于稀溶液 721型 752型 分 光 系 统 检 测 系 统 光源 样 品 室 光源 分光系统 样品室 检测系统 记录系统 记录( 显示）系统 在整个可见光谱区,要求光源： ● 发射连续光谱 ● 具有足够的辐射强度 ● 较好的稳定性 ● 较长的使用寿命 可见光区(320～2500 nm )： 钨灯 将光源发射的复合光分解成单色光， 并可从中选出任一波长单色光的光学系统。 光源 入射狭缝 准光装置 色散元件 (单色器) 出射狭缝 聚焦装置 样品室 检测系统 记录系统 样品室放置各种类型的吸收池（比色皿）和相应的池架附件。 吸收池(或比色皿) 池架 可见光分析时的吸收池材料为玻璃。 利用光电效应将透过吸收池的光信号变成可测的电信号。常用的有光电池、光电管或光电倍增管。 5. 记录系统 检流计、数字显示或微机进行仪器自动控制和结果处理 1.显色反应——将待测组分转变为有色化合物的反应。 2.显色剂——与待测组分形成有色化合物的试剂。 光度分析中，一般应首先利用显色反应将待测组分 转变成有色化合物，然后再进行分析。 (1) 氧化还原显色反应 例如：钢中微量锰的测定，Mn2＋不能直接进行光度 测定。将Mn2＋ 氧化成紫红色的MnO4-后，在525 nm处 进行测定。 Mn2＋ ＋5 S2O82-＋8 H2O =2 MnO4- + 10 SO42-＋ 16H+ (2)配位显色反应 如：Fe3++nSCN- = Fe(SCN)n ● 选择性高 ● 灵敏度高 ε?104 ● 生成物性质稳定，组成恒定 ● 显色剂在测定波长处无明显吸收。 两种有色物最大吸收 波长之差： “对比度”， 要求?? 60nm。 无机显色剂：硫氰酸盐、钼酸铵、过氧化氢等几种。 有机显色剂：种类繁多， 如：偶氮类显色剂：本身是有色物质，生成配合物后，颜色发生明显变化；具有性质稳定、显色反应灵敏度高、选择性好、对比度大等优点，应用最广泛。偶氮胂Ⅲ、PAR等。 三苯甲烷类：铬天青S、二甲酚橙等 1.显色剂用量 2.反应体系的酸度 3.显色温度 4.显色时间 5.溶剂 一般应由实验确定。选择曲线中吸光度较大且恒定的平坦区所对应的条件范围。 1.加入掩蔽剂： 选择掩蔽剂的原则是： ●掩蔽剂不与待测组分反应； ●掩蔽剂本身及掩蔽剂与干扰组分的反应产物不干扰待测组 分的测定。 例：测定Ti4＋，可加入H3PO4掩蔽剂使Fe3+(黄色)成为 Fe(PO４)23-(无色)，消除Fe3+的干扰； 又如：用铬天菁S光度法测定Al3+时，加入抗坏血酸作掩蔽剂将Fe3+还原为Fe2+，消除Fe3+的干扰。 2.选择适当的显色反应条件 如控制酸度等 如：磺基水杨酸测Fe3+时，Cu2+有干扰。 若控制pH=2.5， 则 Cu2+的干扰可消除。 3.做空白试验，扣除空白值。 4.选择适当的参比溶液 5.选择适当的入射光波长