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蓝莓组培育苗技术规程 Technical regulation for in vitro propagation of blueberry 陕西定军山蓝莓科技有限公司 制定 １ 前 言 本标准起草单位：陕西理工学院秦巴蓝莓研究所、陕西定军山蓝莓有限公 司、勉县左哨所蓝莓专业合作社。 本标准主要起草人：李新生、秦公伟、张泽平、党娅、余洋、徐皓、王勇、 黄秋萍、任鹏斌、贺帆帆。 ２ 蓝莓组培育苗技术规程 1 范围 本标准规定了蓝莓组培育苗的术语和定义、外植体的获得和处理、初代培 养、继代培养、试管苗移植的技术要求。 本标准适用于蓝莓组培种苗的繁育。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所 注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包 括所有的修改单）适用于本文件。 GB 4285 农药安全使用标准 GB/T 8321 （所有部分）农药合理使用准则 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 组培苗 young plant by in vitro propagation 利用侧芽作为外植体，采用组织培养技术生产的苗木。 3.2 试管苗 in vitro plantlet ３ 侧芽外植体在试管中培育长成的嫩枝及幼叶。 3.3 组培穴盘苗 in vitro young plant cultivated on tray 移栽在穴盘中培育的蓝莓组培生根苗。 4 外植体的获得和处理 4.1 外植体的获得 选择无病虫危害、无病毒侵染的生长健壮的当年生枝条。 4.2 外植体的消毒 将采取的外植体嫩枝，用洗涤剂水刷洗，经自来水冲洗干净在超净工作台 上，将外植体嫩芽先放入75% 的乙醇溶液中浸泡 10 s 后，用无菌水洗净， 再放入 0.1 ％HgCl2 或 2 ％次氯酸钠溶液中消毒10 min～20min 后，用无菌 水冲洗 3 次～5 次。 4.3 外植体的切段 在超净工作台上，用火焰灭菌的解剖刀、镊子将嫩枝均匀切分成大小约 0.5 cm～0.8 cm 的小段，每段含一到两个芽，接种于事先准备好的诱导培养基 中,每瓶 5～10 株。切断一半插入培养基内，芽露出。 5 初代培养 5.1 初代培养基 基本培养基为WPM 培养基。植物激素为玉米素（ZT ），使用浓度范围为0.3～ ４ 5 mg/L 。 5.2 培养条件 培养温度为 25 ℃±2 ℃。前期暗培养，待有芽萌发后光照强度 3000 lx ～ 10000 lx 培养，光照时间 12h/d～16 h/d。待组培苗生长至大于 5 cm 后，可 以将小苗切断进行继代培养；或继续培养待苗生长满瓶后再继代。 6 继代培养 6.1 继代培养基 基本培养基为WPM 培养基。植物激素有萘乙酸（NAA ），使用浓度范围为 0.1～1 mg/L，玉米素（ZT ），使用浓度范围为 1～10 mg/L。 6.2 培养条件 培养温度为 25 ℃±2 ℃，光照强度 3000 lx～10000 lx，光照时间 12 h/d～ 16 h/d。待小苗生长至大于 5 cm 后，再进行移植。 7 试管苗移植 7.1 基质 基质要求有一定的肥力，疏松透气。pH 值达到 4.5～5.5 。 7.2 炼苗 移植前，将培养瓶放置温室自然散射光下，封口炼苗 3 d～7 d 。然后再开 ５ 口练苗 3 d～7 d，温度控制在 25 ℃±3℃。 7.3 移植 打开培养瓶盖，将已经锻炼的小苗轻轻拉出，栽植于苗床基质中。温度保 持在 15 ℃～28 ℃。 7.4 移植后