第二章蛋白质结构与功能2015lb.pptVIP

天然状态 有催化活性 非折叠状态 －S－S－被还原 无活性 天然状态 －S－S－恢复正确配对 活性恢复 牛RNA酶的变性与复性 尿素 b-巯基乙醇 透析 说明蛋白质一级结构是空间结构形成的基础，而只有具备了特定的空间结构的蛋白质才具有生物学活性 一级结构相似的蛋白质功能相似，一级结构不同的蛋白质功能不同 ACTH、α-MSH和β-MSH一级结构比较 （二）一级结构是功能的基础 蛋白质分子中起关键作用的氨基酸残基缺失或被替代，将严重影响空间结构乃至生物学功能 这种由蛋白质分子发生变异所导致的疾病，称为“分子病” （三）一级结构改变与分子病 镰刀型细胞贫血 镰状红细胞贫血的分子机制 构象是蛋白质活性与功能的根本。 构象为AA序列所规定，而后者又为基因所规定。 二、蛋白质空间结构与功能的关系 构象决定功能 （一）蛋白质的功能依赖于特定的空间结构 肌红蛋白(Mb)与血红蛋白(Hb)的结构 （二）血红蛋白构象变化与结合氧 蛋白质的空间结构决定生物学功能 肌红蛋白（1条多肽链）与血红蛋白（4个亚基，具有完整的四级结构）空间结构有较大差异，其功能也不相同 Hb与Mb的氧解离曲线 氧饱和度 静脉血 动脉血 氧分压 P50 100% - Hb Mb （三）蛋白质构象改变与疾病 蛋白质构象病： 若蛋白质的折叠发生错误，尽管其一级结构不变，但蛋白质的构象发生改变，仍可影响其功能，严重时会导致疾病发生。 疯牛病 人和动物神经退行性病变，具传染性，发病时主要表现为视物模糊、平衡障碍、肌肉收缩等，一般在出现症状后2年内死亡 可能机制： PrPC 未知蛋白质 PrPSC PrPSC 聚集淀粉样纤维沉淀 第 四 节 蛋白质的理化性质 及其分离纯化 The Physical and Chemical Characters and Separation and Purification of Protein 一 、蛋白质的理化性质 （一）蛋白质的两性解离 蛋白质两端的-NH2和-COOH以及侧链中的某些基团均可以在一定的pH值条件下解离为带正电或负电荷的基团。 Pr COOH NH3+ Pr COO- NH3+ Pr COO- NH2 pH=pI pHpI pHpI 此时溶液的pH值称为蛋白质的等电点(pI)。 等电点(pI)：在某一pH值溶液中， 蛋白质酸性基团和碱性基团的解离程度相当 蛋白质分子所带正负电荷相等，净电荷为零 +OH- +H+ +OH- +H+ 蛋白质分子颗粒大小在1~100nm之间,属胶体颗粒范围。在溶液中能形成稳定的胶体 蛋白质胶体的稳定因素： 水化膜 颗粒表面电荷 （二）蛋白质的胶体性质 + + + + + + + 带正电荷的蛋白质 － － － － － － － － 带负电荷的蛋白质 在等电点的蛋白质 水化膜 + + + + + + + + 带正电荷的蛋白质 － － － － － － － － 带负电荷的蛋白质 不稳定的蛋白质颗粒 酸 碱 酸 碱 酸 碱 脱水作用 脱水作用 脱水作用 溶液中蛋白质的聚沉 （三）蛋白质的变性、沉淀与凝固 1. 蛋白质的变性(denaturation) 在某些理化因素作用下，蛋白质的构象被破坏，失去其原有的性质和生物活性，称为蛋白质的变性作用。 常见的变性因素： 强酸、强碱、有机溶剂、生物碱、尿素、胍、重金属 化学因素： 物理因素： 热、紫外线、超声波、剧烈振荡 变性的本质: 破坏非共价键和二硫键，空间结构被破坏，不改变蛋白质的AA排列顺序。 除去变性因素后，有的变性蛋白质又可恢复其天然构象和生物活性，这一现象称为蛋白质的复性 蛋白质的复性(renaturation) 牛胰核糖核酸酶的变性与复性 β-巯基乙醇 尿素或盐酸胍 透析 有活性 无活性 在一定条件下，疏水侧链暴露在外，肽链融汇相互缠绕而聚集，因而从溶液中析出的现象。 2. 蛋白质的沉淀 应用: 蛋白质分离纯化、解毒 变性的蛋白质易于沉淀，有时蛋白质发生沉淀，但并不变性。 3.蛋白质的凝固作用 实际上是蛋白质变性后进一步发展的不可逆结果。 蛋白质变性后的絮状物加热可变成比较坚固的凝块，此凝块不易再溶于强酸和强碱中。 （四）蛋白质的紫外吸收 由于蛋白质分子中含有共轭双键的Tyr和Trp，因此在280nm波长处有特征性吸收峰。蛋白质的A280与其浓度呈正比关系，因此可作蛋白质定量测定。 （五）蛋白质的呈色效应 1. 茚三酮反应 2. 双缩脲反应 蛋白质和多肽分子中肽键在稀碱