CNP2线粒体定位信号以及磷酸酯酶活性.PDF

( ) 2016 6 10 3 Chin J Exp Clin Infect Dis (Electronic Edition), June 2016, Vol.10, No.3 · 380 · 中华实验和临床感染病杂志电子版 年 月第 卷第 期 · · 基础论著 CNP2线粒体定位信号以及磷酸酯酶活性 对抑制HIV-1 Gag蛋白组装作用的影响 【摘要】 目的 研究CNP2在线粒体上的定位以及磷酸酯酶活性是否参与抑制HIV-1病毒颗粒组 装。方法 采用RT-PCR扩增野生型CNP2编码区，插入到真核表达载体pcDNA5 ，构建融合蛋白Flag- CNP2 的表达质粒pcDNA5-Flag-CNP2 。应用融合PCR诱导突变法构建CNP1及CNP2突变表达载体。 CNP表达载体分别与HIV-1假病毒包装质粒pLP1 、pLP2 、pLP/VSVG 、pLenti6-EGFP共同瞬时转染 293T细胞。集落形成实验检测上清病毒滴度，Western blot检测细胞中Gag蛋白p55 、p24 以及细胞培养 上清中p24 的表达情况。结果 与对照组比较，CNP2 、CNP1 、CNP2-S9/22A可以显著抑制细胞中病 毒的释放，培养上清中病毒滴度显著降低（滴度分别为5.66、4.20 、5.75、6.63 Log10IU/ml ，NC组为 7.65 Log IU/ml t = 58.23 17.24 12.77 6.131 P = 0.0035 0.0066 0.0004 0.0039 CNP1 10 ； 、 、 、 ， 、 、 、 ）。 抑 制HIV-1病毒颗粒组装作用更强，Western blot检测培养上清中病毒蛋白完全p24消失。磷酸酯酶结构域 2HM CNP2 HIV-1 CNP2 HIV-1 （ ）突变后 抑制 病毒颗粒组装的作用显著降低。结论 抑制 病毒颗粒组装 需要磷酸酯酶结构域（2HM ）的参与，CNP2 的线粒体定位信号可能会影响其抑制HIV病毒颗粒组装 的作用。 2 3 - HIV-1 【关键词】 ’， ’环核苷酸磷酸二酯酶； 病毒颗粒组装；线粒体定位信号；磷酸二酯酶 活性。 Effect of mitochondrial targeting signal and phosphodiesterase activity of CNP2 on its inhibitory property against HIV-1 assembly Liang Shuntao, Dai Guorui, Li Rui, Jiang Dong, Zeng Hui. Institute of Infectious Diseases, Beijing Ditan Hospital, Capital Medical University; Beijing Key Laboratory of Emerging Infectious Diseases, Beijing 100015, China Corresponding author: Zeng Hui, Email: zenghui@ccmu.edu.cn Abstract Objective To confirm whether the mitochondrial targeting and phosphodiesterase 【