利用拉曼光谱分析顺铂诱导的胃癌细胞凋亡.pdfVIP

第29卷，第9期 光谱学与光谱分析 2 00 and 9年9月 SpectroscopySpectralAnalysis September，2009 利用拉曼光谱分析顺铂诱导的胃癌细胞凋亡 陶站华1，姚辉璐1，王桂文1，黄庶识1，王一兵1，彭立新1，黎永青2 1．广西科学院生物物理实验室，广西南宁530003 2．东卡罗莱纳大学物理系，美国东卡罗莱纳27858—4353 摘要利用激光拉曼光谱对顺铂诱导的胃癌细胞凋亡进行分析，胃癌细胞SGC7901经10p-g·rnL叫顺铂 处理24，48，72 h后，一部分用于荧光染色，另一部分用扫描方式收集细胞的拉曼光谱。光谱结果依次经背 景扣除、平滑、归一化、基线校正、峰拟合等方法预处理。荧光染色结果显示对照组细胞核染色均匀，而药 物处理72h后，核碎裂，呈致密浓染。拉曼光谱结果显示顺铂处理24，48，72h后，与核酸及蛋白质相关的 343 峰均有降低，其中783，1002，1 Cl-n-1峰72h后依次降低为初始值的52％，64％，76％，表明顺铂能够 诱导胃癌细胞凋亡，凋亡细胞内核酸和蛋白质含量降低。以上结果说明，拉曼光谱能提供生物细胞内物质变 化的丰富信息，是实时检测细胞凋亡过程的有效手段。 关键词拉曼光谱；凋亡；胃癌细胞；顺铂 中图分类号：0657．3文献标识码：A 的生物检测技术相比，它具有以下优势：(1)非侵人性，无需 引 言 对细胞进行标记，无需样晶制备；(2)如果选择合适的激发 光波长和功率，不会对细胞造成损伤[81；(3)可以对单细胞 细胞凋亡又称为细胞程序性死亡，是个体发育过程中基 进行原位实时检测，而传统方法得到的是细胞群体的平均信 因调控下的细胞自杀活动，对多细胞牛物的成长发育和生理 息。拉曼光谱的这些特点使其有可能成为一种新的研究凋亡 稳定具有重要作用。细胞凋亡严重失衡不仅影响机体的正常 细胞中物质结构和含量改变的有效手段。 生理活动，甚至导致疾病发生。细胞凋亡与肿瘤的发生、发 顺铂是临床常用的抗肿瘤药物，在胃癌【9]、睾丸癌[1…、 展与转归有着密切的关系，很多抗肿瘤药物也是通过诱导肿 卵巢癌[】¨等疾病的化疗中起重要作用。研究表明顺铂对肿 瘤细胞凋亡发挥治疗作用。研究肿瘤治疗药物诱导的细胞凋 瘤的杀伤是通过促进G2期细胞周期阻滞和凋亡实现的。本 亡过程对阐明药物作用机理、促进抗肿瘤新药开发具有积极 文用顺铂对胃癌细胞进行处理，并利用显微拉曼光谱系统检 意义。 测不同处理时间的细胞的光谱变化，并通过化学计量学方法 凋亡细胞有其特有的形态特征，如细胞全面收缩、胞问 对光谱数据进行处理，以期揭示光谱学变化所反映的生物学 连接丧失、细胞膜皱缩外突、核染色质固缩、形成凋亡小体 内涵，促进对药物引起的细胞凋亡过程的深入理解。 等[1]。除形态特征外，凋亡细胞内的生物大分子也会发生结 构和含蕈的变化，如核酸断裂、某些蛋白质的合成和降解 1实验材料与方法 等。根据凋亡细胞的这些特征性的形态和生化改变，人们开 发了各种检测凋亡的方法，如电子显微镜、流式细胞术、核 1．1细胞培养与药物处理 酸电泳、TUNEL等[2]，但是这些方法都需要对细胞样品进人胃癌细胞SGC7901购于南京凯基生物科技发展有限 行顶处理，如固定、染色，核酸或蛋白质的抽提等。拉曼光 公司，采用添加10％新生牛血清、100U·rnLl青霉素及链 谱是一种分析分子结构和含量的有用工具，拉曼光谱特征峰 霉素的RPMI1640培