自动捎膪与化分析仪操作方法.docVIP

四 血液临床酶学诊断 1 血清酶的总活性测定 酶是由组织细胞合成的具有特殊催化功能的蛋白质，是对化学反应具有强化的催化性，对作用物由严格选择性的生物催化剂。酶的活性是对酶的催化能力大小的度量。酶活性的测定就是酶催化某一化学反应的反应速度。由于酶是蛋白质，其催化的反应速度受温度，PH，离子强度，底物浓度等多种因素的影响，故酶的活性都是用在特定条件下，单位时间内，酶促反应中低物的消耗量或产物的生成量来进行测定。 酶活性的测定采用手工或自动生化分析仪的两种方法进行测定。自动生化分析仪分为半自动分析仪和全自动分析仪两种。半自动分析仪由手工完成样品及反应混合体递送，部分操作由仪器自动完成。全自动生化分析仪则是从加样到出结果的全过程完全由仪器自动完成。按仪器复杂的程度及功能分类分为小型，中型，大型自动分析仪。小型一般分为单通道，中型为多通道，常同时可测2－10各项目，大型多通道的仪器可同时测10个以上项目，分析项目可自由选择。 MD－100型半自动分析仪简介： 本仪器是由美国Sysmtey生化仪器公司生产。该仪器采用单一通道，可连程测试20个以上的项目。该仪器主要分为计算机控制系统，吸样泵，光学系统比色池三个部分。 MD-100型半自动分析仪操作： 〈1〉接通电源，约30分钟。 〈2〉用专用清洗液或自配3%84消毒液清洗仪器。如仪器久未使用需打开仪器侧小门，取下吸样泵小管，用注射器来回推入清洗液，清洗吸样通道。 〈3〉进入所测项目的界面，点击轻轨鼠标右键编辑项目参数。 〈4〉点击轻轨鼠标左键进入运行项目。 〈5〉按仪器提示的方法进行下一步操作，依次吸取空白试剂、标准试剂、样本试剂测试。 〈6〉本项目测试完毕，需用专用清洗液或自配3%84消毒液清洗。 〈7〉退出项目测试，在根目录下关闭电源。 乳酸脱氢酶（LDH-L）测定 a 原理 L-乳酸+NAD正离子——→丙酮酸+NADH+氢离子 b 试剂 原装诊断试剂盒 c 方法 取一定量的R2（Tris缓冲液PH8.9，100mmol/L;KCl 100mmol/L;L-乳酸锂 52mmol/L）加入R1（NAD 6.5mmol/L）轻轻摇动，并倒置几次，完全溶解后，即为工作液。 空白管 样品管 工作液 1.00ml 1.00ml 蒸馏水 0.02ml ------ 样品 ------- 0.02ml 混合均匀，在37℃保温30秒钟，读取初始吸光度（波长340nm），同时开始计时，在精确的1，2，3分钟时，分别读取吸光度，确定每分钟平均吸光度的变化（△A/分） d 上机操作程序 〈1〉按试剂盒说明书编辑参数：点右键进入编辑参数界面。移动鼠标至温度设置处，设定温度为37度；再次移动鼠标至试剂吸入量处，设定试剂吸入量为1.00ml;移动鼠标至样品吸入量处，设定样品吸入量为0.02ml;移动鼠标至保存处，按键点击保存。移动鼠标至读数时间处，设定读数时间为1min，延迟时间30秒。 〈2〉点击轻轨鼠标左键，进入运行界面，按仪器提示，先行清洗吸入空白试剂，仪器自动测试空白管，再按提示吸入测定试剂，仪器自动测试样品管。 〈3〉仪器自动计算结果，人工记录或仪器自动输出结果。 〈4〉本项目测试完毕，点击退出键，仪器提示清洗，清洗完毕，仪器自动退出界面。 e 计算 LDH（U/L）=（△A样品/分－△A空白/分）×F F=V1÷（V2×消光系数）×1000=8095 V1=反应总体积 V2=样品体积 NADH在340nm的毫克分子消光系数=6.3 f 注意事项 〈1〉当△A/分超过0.19时，用0.3ml生理盐水稀释0.1ml样品，在重新测定，结果乘以4。 〈2〉复溶后溶液变混浊，或初始吸光度大于0.5,则不能使用。 g 临床意义 乳酸脱氢酶总活性升高见于急性心肌梗死、充血性心力衰竭、肺梗死、肝炎、贫血、肌营养不良、肾病综合症。 天门冬氨酸氨基转移酶（AST/GOT）测定 a 原理 L-天冬氨酸+ａ-酮戊二酸——→草酰乙酸+L-谷氨酸 草酰乙酸+NADH+氢离子——→L-苹果酸+NAD正离子+水 b 试剂 原装诊断试剂盒 c 方法 波长：340nm 温度：37℃ 比色杯光径：1cm 取一定量R2（Tris缓冲液PH7.8,80mmol/L;L-天门冬氨酸240mmol/L）复溶R1（ａ-酮戊二酸12mmol/L;NADH0.18mmol/L;苹果酸脱氢酶≥1000U/L；LDH≥5000U/L） 空白管 样品管 工作液 1.00ml 1.00ml 蒸馏水 0.10ml -------- 样品 ------ 0.10ml 混合均匀，在反应温度保温1分钟，读取初始吸光度，同时开始计时，在精确的1，2，3分钟时，分别读取吸光度，确定每分钟平均吸光度的变化（△A/分）。