发酵液溶磷含量测定0.docVIP

编　号 共 4 页 制订人 制订日期 审核人 审核日期 批准人 批准日期 颁发部门　 质量管理部 实施日期 发酵液溶磷含量测定SOP 目的： 制订发酵液溶磷含量测定标准操作规程，确保发酵液中溶磷含量检测的准确。 适用范围： 适用于公司发酵液溶磷含量的检验。 责任者： 质量检验部QC操作人员 四、内容： 1、原理： 正磷酸盐在酸性溶液中与钼酸铵反应生成磷钼酸铵，再用抗坏血酸使之还原成低价的钼蓝，此蓝色溶液符合比尔定律。 2、 仪器：电子分析天平 分光光度计 恒温水浴埚 容量瓶 刻度吸管 3、磷标准溶液配置 取一定量KH2PO4(A.R)置于称量瓶内，在105℃干燥至恒重，精密称取0.439克，加水溶解，加入1mL硫酸，于100mL容量瓶中定容至刻度，摇匀，即得1mg/mL磷标准溶液。有效期10天。 准确吸取上述磷标准溶液1mL于100mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，即得 10ug/mL磷标准溶液。此标准溶液现配现用。 4、定磷试剂配制： 将下述溶液3mol/L硫酸、水、2.5%钼酸铵、10%抗坏血酸按体积比1∶2∶1∶1的比例混匀即得。现配现用。 5、绘制磷标准曲线 取7支试管，分别按下表加入各试剂，充分摇匀，45℃水浴20分钟，冷却至室温，按照《分光光度计校准使用SOP》在660nm波长下测量其OD值。以溶液磷含量为纵坐标，OD值为横坐标，绘制标准曲线，得到回归方程。 管号 0 1 2 3 4 5 6 10ug/mL磷标准溶液（mL） 0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 溶液磷含量（ug） 0 5 10 15 20 25 30 水（mL） 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 0 定磷试剂（mL） 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 线性回归系数≥0.999 6、样品磷含量检测 取发酵液离心后上清液0.1mL，至试管中，加2.9 mL水，再加入定磷试剂3mL，振摇，于45℃水浴20分钟，冷却至室温，以空白做对照，按照《分光光度计校准使用SOP》于660波长测OD 值。 5计算： 根据磷标准曲线以及稀释倍数计算磷含量(ug/mL)。 五、文件发放范围 公司生物产业部质量管理部1份，质量检验部2份，产业部相关领导每人1份，存档2份。 六、变更记录： 上版文件编号 上版文件实施日期 本次变更原因、依据及详细变更内容 SL-QAD-248-00 2003.02.10 采用新版格式和编号，增加文件修订内容 SLB-QC-010-01 2006.08.19 增加了定磷试剂的配制、标定方法、标定记 录，规定了定磷试剂的有效期 磷标准曲线绘制记录 批号： 编号：SLB-QC-010-02R1 磷标准溶液配制：（天平编号： ） 精密称取0.439克于105℃干燥至恒重的磷酸二氢钾，加水溶解，加入1mL硫酸， 于100mL容量瓶中定容至刻度，摇匀，即得1mg/mL磷标准溶液。有效期10天。 配制人： 配制日期： 年 月 日 准确吸取上述磷标准溶液1mL于100mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，即得 10ug/mL磷标准溶液。现配现用。 配制人： 配制日期： 年 月 日 定磷试剂配制：将下述溶液3mol/L硫酸、水、2.5%钼酸铵、10%抗坏血酸按体积比1∶2∶1∶1的比例混匀即得。现配现用。 试剂取用数量: 3mol/L硫酸 水 2.5%钼酸铵 10%抗坏血酸 配制人： 配制日期： 年 月 日 磷标准曲线的绘制：（分光光度计编号： ）取7支试管，分别按下表加入各试剂，充分摇匀，45℃水浴20分钟，冷却至室 温，于660nm波长处分别测溶液OD值。以溶液磷含量为纵坐标，OD值为横坐标，绘制标准曲线，得到回归方程。 管号 0 1 2 3 4 5 6 10ug/mL磷标准溶液（mL） 0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 水（mL） 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 0 定磷试剂（mL） 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 测得溶液OD值为： 管号 0 1 2 3 4 5 6 溶液磷含量（ug） 0 5 10 15 20 25 30 OD值 线性回归方程（磷标准曲线）为： 线性回归系数应≥0.999 线性回归系数为： 符合规定□ 不符合规定□ 标定人： 标定日期：