串珠镰刀菌FvBCK1调节细胞壁完整性分生孢子发育及色素的产生.doc

福建农林大学硕士学位论文 串珠镰刀菌FvBCK1调节细胞壁完整性、分生孢子 发育及色素的产生 学 科 门 类：农 学 一级学科名称：植物保护 二级学科名称：植物病理学 研 究 方 向：分子植物病理学 研 究 生：陶 红 指 导 老 师：鲁国东 教授 王宗华 研究员 完 成 时 间：二0一二年四月 The Master Degree Thesis of Fujian Agriculture and Forestry University FvBCK1, a BCK1 homolog, is required for cell wall integrity, microconidia development and pigments production in Fusarium verticillioides Subject Category：Agronomy Primary Subject: Plant protection Secondary Subject: Phytopathology Research Direction: Molecular Phytopathology Supervisor: Prof. Dr. Guodong Lu Prof. Dr. Zonghua Wang Submitted Date: April, 2012 College of Plant Protection Fujian Agriculture and Forestry University Fuzhou, Fujian, P.R.China, 350002 独创性声明 本人声明，所呈交的学位（毕业）论文，是本人在指导教师的指导下独立完成的研究成果，并且是自己撰写的。尽我所知，除了文中作了标注和致谢中已作了答谢的地方外，论文中不包含其他人发表或撰写过的研究成果。与我一同对本研究做出贡献的同志，都在论文中作了明确的说明并表示了谢意，如被查有侵犯他人知识产权的行为，由本人承担应有的责任。 学位（毕业）论文作者亲笔签名：　　　　　　　日期：　 论文使用授权的说明 本人完全了解福建农林大学有关保留、使用学位（毕业）论文的规定，即学校有权送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅; 学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。 　　　　　　 保密，在　　年后解密可适用本授权书。 □ 　　　　　　 不保密，本论文属于不保密。　　　 □　　 　 学位（毕业）论文作者亲笔签名：　　　　　　　日期： 指导教师亲笔签名：　　　　　　　　　　　　　摘要 I Abstract II 第一章 综述 1 1.1 MAP kinase 信号途径在植物病原菌中的作用 1 1.1.1 Fus3和Kss1 MAPK途径 1 1.1.2 Hog1 MAPK 途径 4 1.1.3 Mpk1细胞壁完整性途径 6 1.2 植物病原菌串珠镰刀菌 7 1.3 本研究的目的和意义 8 第二章 材料与方法 10 2.1 实验材料和试剂 10 2.1.1 供试菌株 10 2.1.2 致病性鉴定材料 10 2.1.3 常用生化试剂 10 2.1.4 抗生素 10 2.1.5培养基及配方 11 2.2 实验方法 11 2.2.1 串珠镰刀菌中MAPKKK FvBCK1的生物信息学分析 11 串珠镰刀菌的FvBck1 11 串珠镰刀菌的MAPKKK FvBck1结构域预测 11 六种真菌中MAPK级联元件同源蛋白的系统进化关系分析 11 2.2.2基因敲除策略 12 2.2.3 引物设计与PCR扩增反应 12 引物设计 12 PCR扩增反应 14 2.2.4 PCR产物纯化 14 2.2.5 TA克隆 15 2.2.6酶切与连接 15 2.2.7串珠镰刀菌FvBCK1基因敲除质粒载体的构建 16 2.2.8串珠镰刀菌FvBCK1基因敲除突变体的互补 16 2.2.9串珠镰刀菌突变体的初步筛选 16 2.2.10反转录PCR、（RT-PCR）、基因FvBCK1表达验证和实时定量PCR 17 反转录PCR 17 基因FvBCK1表达验证 17 实时定量PCR 17 2.2.11串珠镰刀菌菌落生长速率的测定 18 2.2.12串珠镰刀菌产孢测定 18 2.2.13 串珠镰刀菌细胞壁敏感性测定 18 2.2.14 串珠镰刀菌致病性测定 18 第三章 结果 19 3.1 串珠镰刀菌中BCK1同源物的鉴定 19 3.2 FvBCK1敲除突变体和互补转化子的产生 20 3.3 FvBCK1缺失突变体的生长状况 21 3.4 FvBCK