实验八 - 离子交换柱层析.pptVIP

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2017-05-30 发布于浙江
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实验八 - 离子交换柱层析

实验八离子交换柱层析分离氨基酸 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 一实验原理各种氨基酸分子的结构不同，在同一pH时与离子交换树脂的亲和力有差异，因此可依亲和力从小到大的顺序被洗脱液洗脱下来，达到分离的效果。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 二实验步骤 1. 树脂的准备：将干的树脂用水浸泡一天——然后用2mol/L的HCl浸泡1h——然后再用2mol/L的NaOH浸泡1h——然后用水洗至中性(已做好) 2. 装柱：——注意柱中不能有气泡层析柱中先倒入2cm左右的缓冲液——将洗至中性的树脂用缓冲液冲洗一遍——然后将树脂倒入到层析柱中——装到离柱口2cm处——然后剪一小圆形滤纸，垫在树脂上(注意树脂不要跑到滤纸上面去) Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 3. 氨基酸的洗脱：准备64支刻度试管——编号——用移液管取1ml混合氨基酸——加入柱中——然后马上开始用刻度试管接洗脱液——每支试管接1ml（注意控制层析柱的速度，慢一点较好）——同时注意层析柱中缓冲液的液面不要低于滤纸，注意及时补充缓冲液，保持液面不变 4. 测OD值: 收集60支试管后——每支试管中加入1 ml显色剂——然后在沸水浴中加热15min——冷却——每支试管加1.5ml 50％乙醇——搅拌均匀——静置10min——测OD570nm，以第二管为参比管 5. 以洗脱体积为横坐标，以OD值为纵坐标作图。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 本次实验的特殊安排此次实验6个人一组，全班共分8组，每组依次接8个试管，一共接64个试管，8个组共同完成一个实验。组数第一组第二组第三组第四组第五组第六组第七组第八组用量筒接 0 ml 8ml 16ml 24ml 32ml 40ml 48ml 56ml 试管号 1～8 9～16 17～24 25～32 33～40 41～48 49～56 57～64 如表所示：用量筒接取本组相应数值的洗脱液后，再用试管接取，每管接1ml,共接8个试管。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.