实验毛细血管采血白细胞计数.pptVIP

实验一 毛细血管采血 白细胞计数 临床检验基础实验 王 梅 江苏大学基础医学与医学技术学院 临床检验与输血教研室 第一部分 毛细血管采血 毛细血管采血即皮肤采血法，主要用于需血量微小的检查项 目。所获得的末稍血不单纯是毛细血管血，实际是是微动脉、微 静脉和毛细血管的混合血，并依采血时挤压的力度不同含有少量 细胞间质和细胞内液。 毛细血管采血器具 采血笔 采血笔结构示意图 采血笔的使用 拧下采血笔前端笔帽 安装采血针 采血 采血针 1、准备材料 2、选择采血部位 3、按摩皮肤 4、消毒皮肤 　　用75%乙醇脱脂棉球擦拭采血部位的皮肤，待干。 5、针刺皮肤 　　用左手拇指和示指固定绷紧皮肤，右手持采血针自指尖腹内侧迅速刺入 6、拭去第一滴血 7、吸血 　　血液自然流出时，用微量吸管吸血至刻度 8、止血 毛细血管采血操作步骤 1、采血前准备 　　患者、器材 2、选择采血部位 　　皮肤完整处采血 3、消毒皮肤 　　无菌操作、一人一针一管、皮肤消毒应待乙醇或碘酊挥发后采血 4、针刺皮肤 　　迅速，伤口深度 5、拭去第1滴血 6、吸血与检测 　　微量吸管校准、血液充入管内的速度、应及时测定 毛细血管采血注意事项 第二部分 白细胞计数 原理：血液经稀乙酸定量稀释并破坏成熟红细胞，在血 细胞计数池内计数规定区域内的白细胞总数，换 算成每升血液中白细胞数。 试剂： 白细胞稀释液：冰乙酸 2.0ml 10g/L亚甲蓝3滴 加蒸馏水 至100ml 器材： 微量吸管、带孔吸头、 改良牛鲍血细胞计数板及专用盖片 1ml刻度移液管、小试管、洁净软纱布、 干棉球、光学显微镜 微量吸管的使用 1、将带孔乳胶吸头轻轻套在微量吸管上，连接紧密不漏气； 2、拇指和中指夹住吸头中下端，示指盖住吸头小孔，拇、中指轻微挤压排出适量空气； 3、将微量吸管插入抗凝血，拇、中指缓慢松劲（松动快血液会吸入吸头），吸取抗凝血至所需刻度略上方（不能有气泡），吸管呈水平略下垂，松开示指； 4、用干棉球顺吸管向下拭尽管外余血（保证血量准确），轻触吸管下口吸去多余血量，使管内抗凝血正处所需刻度； 5、将微量吸管插入小试管底部，三指轻微用力慢慢排出血液，用上清液冲洗管内余血2-3次，轻摇试管混匀； 6、拔出微量吸管弃入污物桶。 改良牛鲍血细胞计数板结构 计数板上下各一个计数池 血细胞计数池的方格 计数区域分为9个大方格 四角的大方格各划分为16个中方格 中央大方格划分为25个中方格 四角的大方格为白细胞计数区 中央大方格四角和正中5个中方格为红细胞计数区 白细胞数/L= N/4 ×10 ×106 ×稀释倍数 每个大方格的容积= 面积×高度=1mm2 ×0.1mm=0.1mm3 (μl) 每个大方格的面积= 1mm×1mm=1mm2 （N：4个大方格细胞总数） 细胞计数原则 大方格四边压线细胞数左不数右，数上不数下， 弓形移动 （1）加稀释液 用移液管向小试管内加入0.38ml白细胞稀释液。 （2）采血、稀释　用微量吸管采血20ul，拭去管外余血，释放于小试 管底部，用上部稀释液洗净吸管内余血，轻摇试管混匀，静置等其溶血。 （3）清洁计数板及盖片（动作轻柔），夹持盖片缘纵向前推轻放于两侧支持堤上。 （4）充计数池　将小试管轻微振荡2min，立即以一次性微量吸管吸取混匀后的白细胞悬液，充入计数池内。静置2-3min，使细胞沉于计数池底面。 （5）调试显微镜 将计数板放置载物台上，转至低倍镜（10×），调节聚光器使光线较暗，调节旋钮找到方格线，调节光亮。 （6）计数 低倍镜下计数四角4个大方格内白细胞总数，压线细胞数上不数下，数左不数右。 白细胞计数操作步骤 (1)稀释液密封保存，防止污染，小试管、计数板、盖片均须清洁，以免杂质、微粒等被误认为细胞。 (2)采血时针刺深度必须适当，不能过度挤压，防止组织液渗入或采血时间太长引起血液凝固。 (3)稀释液和采血量要准确，充分混匀，充液适量，无不足、外溢和气泡，细胞分布均匀。 (4)白细胞总数在参考范围内，大方格间的细胞数不得相差10个以上，两次重复计数误差不得超过10％。 (5)白细胞数量过高时，可加大稀释倍数，白细胞数量过低时，可计数8个大方格的白细胞数或取双倍血量。 (6)调试显微镜 将血细胞计数板平放于载物台，低倍镜处所充计数池正中盖片略上方，向下微调载物台（防止压碎盖片）至看清计数区域内分隔线条为止。 白细胞计数操作注意事项 实验报告内容 原理 试剂器材 操作步骤 实验结果 注意事项 思考题