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- 2017-05-27 发布于浙江
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实时荧光PCR
PCR _UU、NG、CT测定
LOREM IPSUM DOLOR
PCR技术基本原理
一、定义
PCR(Polymerase Chain Reaction)即聚合酶链式反应,是指在DNA聚合酶催化下,以母链DNA为模板,以特定引物为延伸起点,通过变性、退火、延伸等步骤,体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA的过程。是一项DNA体外合成放大技术,能快速特异地在体外扩增任何目的DNA。可用于基因分离克隆,序列分析,基因表达调控,基因多态性研究等许多方面。
二、PCR反应的基本过程
①变性(denaturation)
将模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA经加热至94℃左右一定时间后,双链之间的氢键断裂,双股螺旋解链,变成两条单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备。
二、PCR反应的基本过程
②退火(annealing)
模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;
二、PCR反应的基本过程
③延伸(extension)
DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按A-T、C-G碱基配对与半保留复制原则,合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链。重复变性--退火--延伸的循环过程,就可获得更多的“半
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