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2100检测简介 赖琼英 2100检测简介 • 一、2100检测在整个环节中的作用 • 二、2100检测仪器 • 三、2100检测的工作原理 • 四、Cliper检测步骤 • 五、Caliper检测过程中的注意事项 • 六、产前文库的峰图判断 2100检测的作用 • 产前实验流程 抽血-血浆分离-DNA提取-建库- QC(QPCR2100)-上机-数据分析-报告发放 • 2100检测是对文库进行定性以及定量新一 代测序质控.定性则是判断文库构建是否成 功，而定量是有别于QPCR并作为QPCR的 参照为上机提供参考。 2100检测所用仪器 • Agilent 2100 Bioanalyzer 2100检测所用仪器 • Caliper LabChip GX Agilent 2100 Bioanalyzer 、Caliper GX对 比 只针对Kit1000 仪器名称 Agilent 2100 Bioanalyzer Caliper LabChip GX 片段检测范围 25~1000bp 25~1000bp 检测所需时间 12个样品40分钟 96个样品2小时16分钟 检测成本 12RMB(8RMB)/个样品 3-4RMB/个样品 定性范围（以 0.1–50 ng/μL 0.1–50 ng/μL ladder 作为样品） 检测所需样品体积 1 μL 理论：1.5μL 实际：2μL 2100检测原理 • 一句话概括--可定量的电泳仪 Agilent 2100 Bioanalyzer 、Caliper LabChip GX 都是基于芯片实验室技术的核酸分析系统，通过 微流体技术对样品进行分离。当给芯片加入电压 时，样品便在芯片上的显微蚀刻管道中进行毛细 管电泳，在样品流动过程中，不同DNA 片段根据 其大小被分离。凝胶-染料基质中的荧光染料可嵌 入DNA双链，通过激光激发荧光，使其被仪器检 测到，仪器依据收集到的荧光信号强度对样品定 量。 定性及定量原理 • Agilent 2100 Bioanalyzer每次独立的检测 都是ladder最先出来的，而caliper也是每12 样品之前会首先跑ladder，ladder会根据自 身的各个条带（已知size ）及其相对应的迁 移时间，形成一个迁移时间和size的函数关 系，样品孔中的特定的DNA片段就能根据 迁移时间算出size来。ladder孔和样品孔中 的marker起到对齐和定范围的校准作用。 定性及定量原理 • DNA 定量则是一个多步骤的过程。第一步 ，将特定DNA片断的面积与各个样品中均 存在的marker （已知浓度）的面积进行比 较。第二步，使用经验校正因子来校正已 知谱带的面积。第三步，由校正面积计算 得出未知谱带的浓度。 相对于传统电泳优势 • 1. 高质量的结果：提供高度准确的芯片电泳 数字化数据。 • 2. 快速得出结果：比传统的凝胶电泳的速度 快高达数十倍 。 • 3. 重现性高的结果：自动进行样品分离与分 析，提供标准化的、重现性高的结果 。 • 4. 先进、易用的软件：操作简便，便于数据 处理、分析与存档 。 • 5.耗样量少：正常检测只需要1-1.5ul样品。 • 6.安全：最大限度地减少与