SDSPAGE电泳1.pptxVIP

实验四 蛋白质分子量的测定 SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳法; 聚丙烯酰胺凝胶电泳（ PAGE ）是根据被分离物质所带的电荷多少及其分子大小、形状的不同，在电场的作用下，产生不同的移动速度而分离的方法。它具有电泳和分子筛的双重作用。 ;SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（ SDS) ，是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS（十二烷基硫酸钠）。 SDS是阳离子去污剂，作用有四：去蛋白质电荷、解离蛋白质之间的氢键、取消蛋白分子内的疏水作用、去多肽折叠。（空间构象破坏） ;蛋白质与SDS分子按比例(1.4gSDS/g蛋白质)结合，形成带负电荷的SDS-蛋白质复合物，其负电荷远远超过了蛋白质分子原有的电荷,因而降低或消除了各种蛋白质分子之间天然的电荷差异，由于SDS与蛋白质的结合是按重量成比例的，因此在进行电泳时，蛋白质分子的迁移速度取决于分子大小。 ;带负电荷的SDS-蛋白质复合物;当分子量在15KD到200KD之间时，蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系，符合下式： logMW=K-bX， 式中：MW为分子量，X为迁移率，k、b均为常数。 若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。;SDS标准曲线;二、凝胶的原理;常用的催化剂（包括催化剂和加速剂）;（ 2 ）核